1.陽(yáng)性成分的判斷:通常所指的陽(yáng)性,是指所需研究的細胞陽(yáng)性。在腫瘤中就是指腫瘤細胞的陽(yáng)性。其他間質(zhì)細胞、炎癥細胞等不應計入。在判斷中,出血壞死區、受擠壓的組織及切片邊緣不應計入。

   3.觀(guān)察視野的大小:應先用低倍鏡,后用高倍鏡,且不少于5個(gè)高倍視野或1000個(gè)細胞。有些低倍鏡觀(guān)察到的細胞并非真正陽(yáng)性。通過(guò)高倍鏡仔細觀(guān)察,可以剔除一些定位不準確的陽(yáng)性細胞及一些并非所需研究的細胞的陽(yáng)性。

   從上述情況可以看出,免疫組織化學(xué)結果的判斷標準有待于進(jìn)一步統一。當然在判斷結果上,除了判斷標準,還有其他一些需要注意的問(wèn)題。下面談?wù)勎覀兊目捶ā?/span>

   4.與背景的對比:并非細胞內出現棕褐色即為陽(yáng)性。很重要的一點(diǎn)在于細胞和周?chē)尘暗膶Ρ?。纖維結締組織在顯色時(shí)通常相當容易著(zhù)色,表現為一片棕黃(尤其在運用多克隆抗體時(shí),背景往往較深)。此時(shí)只有當細胞的棕黃色程度明顯高出背景者才為陽(yáng)性。在操作過(guò)程中,也可運用一定的方法來(lái)降低背景著(zhù)色,如染色前用蛋白酶消化、H2O2:和正常血清保護等。近年來(lái)的親和素一生物素標記鏈霉菌素(LSAB)一微波免疫組織化學(xué)染色法,比用蛋白酶消化切片陽(yáng)莊率和陽(yáng)性強度均有提高,且更不容易引起非特異染色,背景更加清晰。這是一個(gè)值得推廣的好方法。

三、陽(yáng)性的判斷標準
  

    在癌基因和抑癌基因的判斷標準上,曾有人建議將免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)方法的結果加以比較來(lái)設定標準。這有一定的參考價(jià)值。有文獻報道,若p53的免疫組織化學(xué)標準定的太低,則DNA測序不應有陽(yáng)性結果。但這個(gè)方法也有很大的局限性。因為免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)方法各有其特點(diǎn),它們的結果并不完全一致。Sgorgen等比較了p53。DNA測序和免疫組織化學(xué)的結果,發(fā)現用免疫組織化學(xué)方法判斷p53突變約有33%的假陰性和30%的假陽(yáng)性。Elledge認為p53免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性不一定是p53突變的結果,如正常細胞周期波動(dòng)、對DNA損傷的反應、與其它細胞內蛋白的結合、P53負反饋調控機制的障礙均可導致p53蛋白檢測陽(yáng)性。分子生物學(xué)測得p53突變,免疫組織化學(xué)不一定表現為陽(yáng)性,因為在伴有框架改變或編碼序列無(wú)義突變時(shí),p53蛋白缺少、縮短或不穩定,免疫組織化學(xué)方法反而檢測不到p53蛋白。但在某些啟動(dòng)子區域或特殊區域發(fā)生的p53突變,DNA測序可檢測不出,而免疫組織化學(xué)卻表現為陽(yáng)性。我們認為,無(wú)論是那些用于診斷和鑒別診斷的指標,還是癌基因、抑癌基因蛋白、受體或細胞增殖指標,都應有一個(gè)統一的判斷標準。這樣對病理診斷才有價(jià)值,日常的研究工作才真正得以統一。