蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin- eosin staining),簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色法,是石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內的染色質(zhì)與胞質(zhì)內的核糖體著(zhù)紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著(zhù)紅色。蘇木精是一種天然染料,它本身并不能染色,在經(jīng)氧化后變成蘇木紅才是真正的染料,蘇木精對細胞核的親和力并不強,而在媒染劑的幫助下才能較好的顯示細胞核,此時(shí)細胞核呈紅色,只有在堿性環(huán)境中,蘇木紅才變成藍色。伊紅Y是人工全盛染料,它可能是通過(guò)滲透或彌散作用完成染色的,因此和組織萬(wàn)分結合是不牢固的。它對細胞質(zhì)著(zhù)色。一般的組織變化和組織產(chǎn)物都可以通過(guò)這一染色法顯示出來(lái)。是形態(tài)學(xué)最常用的染色方法。直到目前為止,病理組織學(xué)的基本知識,絕大多數都是從觀(guān)察HE染色標本中得來(lái),在質(zhì)量較佳的HE染色切片上,各種組織或細胞的一般形態(tài)結特點(diǎn)都可以觀(guān)察到。

    對手術(shù)室切除的全部或部分器官或大塊組織切除標本;各種纖維內窺鏡取材的小塊組織標本:各種穿刺取材的穿刺小標本,各種細胞學(xué)標本,一些特殊檢查的體液或血液標本,在取材時(shí)要做到準確、迅速、完整和具有代表性,從而保證組織病理的制片質(zhì)量。病理科選材制片時(shí)根據不同組織用不同固定、脫水時(shí)間,不同的制片染色方法,例如:各種穿刺取材的小標本固定、脫水時(shí)間應縮短,脂肪組織固定脫水時(shí)間應延長(cháng)。硬組織用新切片刀制片。軟、破碎組織和活檢組織已使用過(guò)舊切片刀制片。

    HE染色時(shí)根據不同組織選不同染色、脫水、脫臘時(shí)間。HE染色操作程序如下:1)二甲苯去蠟(經(jīng)2次)5～ 10 min。2)無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各1～ 2 min,然后蒸餾水洗3 min(換數次)。3)蘇木紫液染色約3～ 5 min(視染液種類(lèi)和著(zhù)色情況增減)。4)水洗;1%酸性乙醇(鹽酸1 mI,70%乙醇99 ml),或1%鹽酸分化。顯微鏡下控制。5)流水浸洗至少15 min,至細胞核呈藍色。也可短時(shí)水洗后,浸于40℃溫水使核變藍。顯微鏡觀(guān)察,若核染色過(guò)深或不足,應再分化或重染。6)伊紅液染0.5～ 1 min后,95%乙醇2次,無(wú)水乙醇2次,每次約1～ 2 min。7)苯酚二甲苯(1∶ 3)5 min。8)二甲苯2次,每次3～ 5 min。9)用中性樹(shù)膠或DPX以蓋片封片,貼標簽。

    染色各步驟所需的時(shí)間,常受溫度、切片厚度等影響,可根據鏡下觀(guān)察所見(jiàn)酌情予以調整。各種染料試劑一般選用化學(xué)純。各種染料著(zhù)色效果常因生產(chǎn)廠(chǎng)和批號不同而異,啟用任何新品,均應先試染。配成的染液、試液應盛于有色試劑瓶?jì)?瓶簽應寫(xiě)明名稱(chēng)、含量、配制年月日,順序保存于避光櫥中,必要者放冰箱內。凡須臨用時(shí)配制者,配量應適當。但對組織化學(xué)反應(尤其是酶),其時(shí)間、溫度等因素務(wù)必恒定,且應做對照片。染液著(zhù)色力顯著(zhù)減退時(shí)應更新,染色反應不正常,應檢查染液及試劑是否失效或誤用。染色過(guò)程中,勿使切片干燥,以免影響細胞形態(tài)。染色完畢后用顯微鏡檢查染色結果,是否符合要求,并核對標本種類(lèi)、號碼、數量是否無(wú)誤,以保證制片的質(zhì)量,為臨床病理診斷墊定堅實(shí)基礎。

    組織細胞取材、固定、脫水、切片的質(zhì)量對HE染色影響很大,組織染色的質(zhì)量直接影響到臨床診斷,同時(shí)也影響臨床治療。所以對各種不同的標本取材要求不一樣,包括取材的范圍、取材方法,取材用的工具或者同樣的工具要求采用不同的使用方法來(lái)切取標本。以防擠壓組織,引起組織結構的變形。鉗取困難時(shí)可采取針吸,實(shí)質(zhì)性臟器腫物直徑大于2 cm者均可針吸。例如,肺癌表面常覆蓋有一層較厚的凝固性壞死或脂性分泌物,為提高標本的陽(yáng)性率,可采用針吸方法,深部取樣,體液量多要取其離心后的沉渣。骨組織要進(jìn)行脫鈣,否則造成制片困難,破壞細胞結構,HE染色得不到良好的效果,影響臨床病理診斷。

    凡是需要送檢的各種組織,除了有特殊要求外,都要首先固定。固定的目的在于盡量使組織和細胞保持與活體時(shí)相似的成份和形態(tài),防止組織自溶和細菌性腐敗的發(fā)生使原有構造消失影響診斷。不能固定又不能及時(shí)送檢處理的標本要盡快放在低溫或超低溫條件下保存,固定標本所選固定劑及容器應據標本類(lèi)型和檢查項目而定。通常用10%福爾馬林或95%酒精固定,這是最常用的固定液。但仍應及時(shí)送檢,防止組織固定時(shí)間過(guò)長(cháng)變脆、變硬影響制片的效果,因此而影響診斷,給病帶來(lái)治療上的困難。固定組織時(shí),固定液要足量,一般至少應為組織塊總體積的5～ 10倍以上,而且應在組織取下后立即或盡快放入適當的固定液中。大多數組織的固定時(shí)間為3～ 24 h,然后保存于70%酒精中,可在室溫25℃固定,如低溫(如4℃)固定時(shí),固定時(shí)間應相應延長(cháng)。最常用的固定方法為浸泡固定法。

    HE染色要注意各種試劑的濃度和量及環(huán)境溫度和濕度,確保制片的質(zhì)量,組織染色的質(zhì)量直接影響到臨床診斷,同時(shí)也影響臨床治療,在日常工作中病理技術(shù)人員要嚴格遵守各項操作規程,保證臨床資料的準確性,保證病理診斷的準確性。通過(guò)對不同的組織病理采用不同的固定、脫水、制片、HE染色方法,使甲級制片率上升到96%以上,乙級片和丙級片下降20%,杜絕丁級片,大大的提高了HE染色質(zhì)量及制片的質(zhì)量,提高了病理診斷準確率,也提高了臨床治愈率,為臨床提供準確的病理資料。由此也認識到病理技術(shù)HE染色是病理診斷、臨床診斷、臨床治療中不可確少的一個(gè)重要組成部分,通過(guò)它可以做出正確的病理診斷和發(fā)現尋求別的輔助方法,以達到準確完整的病理診斷。

    目前，病理診斷室現代醫學(xué)界中的一種最為具有權威性的臨床病理診斷方法，其診斷結果的準確性，不僅僅只取決于病理醫生的技術(shù)水平，而且還與組織病理片的處理和染色效果密切相關(guān)。隨著(zhù)人們法律意識和自我保護意識的不斷提升，病理診斷的風(fēng)險也有逐年上升的趨勢，在現實(shí)社會(huì )中，病理技術(shù)由于種種原因往往得不到足夠的重視，為了提高臨床病理診斷的準確性，一方面病理醫生必須加強檢測的責任心，提高診斷水平，另一方面更應該提供優(yōu)質(zhì)的組織病理切片，以保證診斷的準確性。病理工作目前普遍存在標本固定時(shí)間欠缺、組織脫水進(jìn)行的不徹底、試劑使用過(guò)程中濃度變化，影響了切片的質(zhì)量，無(wú)法提高病理的診斷正確率。

    病理科室在選擇材料進(jìn)行病理切片制作中，應該據不同組織采用不同的固定、脫水時(shí)間、不同的制片染色方式。手術(shù)室中切除的全部或者部分器官或者采用大塊的組織切除標本，各種各樣細胞學(xué)的標本，特出檢查的體液或者血液標本，病理科室醫生取材過(guò)程中要做到準確、迅速、完整以及具有代表性。HE 染色操作的流程主要包括：細胞涂片均潮干后固定在濃度為 95% 的乙醇中浸泡 15 min，顯微鏡觀(guān)察后，
在之前固定的切片中選定進(jìn)行免疫染色的區域，在區域的背面載玻片中用簽字筆進(jìn)行標記，標記號需要進(jìn)行染色的抗體。后將細胞涂片按照順序經(jīng)過(guò)二甲苯、梯度的乙醇溶液和水，將涂片上的蓋玻片及樹(shù)膠洗脫完全；后加入 0.5% 鹽酸 - 乙醇中將蘇木紅的顏色進(jìn)行清洗，后采用水進(jìn)行沖洗，加入稀釋后的氨水將伊紅的顏色脫掉；將載玻片單獨拿出后浸泡于水中，多次進(jìn)行洗滌，采用樹(shù)膠或者 DPX 以蓋片封片，帖標簽；根據鏡下觀(guān)察到的細胞形式進(jìn)行適當的調整，染色各個(gè)步驟所需要的時(shí)間，會(huì )受到溫度、切片厚度等的影響；各種染料試劑一般均以化學(xué)純?yōu)橹?。染色完畢后采用顯微鏡檢查染色的結果，核對標本的種類(lèi)、號碼以及數量，保證切片的質(zhì)量。

   病理科室對于組織細胞的取材、脫水、切片的質(zhì)量對于 HE 染色的結果具有較大的影響，組織切片染色的質(zhì)量直接影響著(zhù)病理切片的診斷結果，對于診斷不明確的結果也會(huì )延伸到臨床中對疾病的治療，因此，不同的標本要有不同的取材方式，包括了取材標本的范圍，對于標本的取材方法。HE 染色過(guò)程中關(guān)系染色成敗的最關(guān)鍵的因素取決于對細胞核的著(zhù)色，由物理及化學(xué)共同的作用進(jìn)行這項工作，一方面主要是因為組織內部有許多微小的細孔，染料滲透后與組織進(jìn)行牢固的結合，組織吸收染料后逐漸擴散、溶解，進(jìn)而牢牢的固定；另一方面在于組織細胞內部含有酸性及堿性的物質(zhì)，含有的酸性物質(zhì)可以與染液中的部分陽(yáng)離子進(jìn)行結合，生成固定的分子，含有堿性物質(zhì)的與染液中的陰離子結合，共同起到牢固性的作用。 

    固定的主要目的在于使組織及細胞保持與活體時(shí)相似的成分以及形態(tài)，防止制片過(guò)程中組織的自溶，組織原有的構造消失或者被破壞而影響了診斷的結果。固定后應該及時(shí)的送檢，防止組織固定時(shí)間過(guò)長(cháng)后導致變脆、變硬而影響了切片的效果，影響診斷結果，導致錯誤的治療。HE 染色過(guò)程中應該注意采用的試劑的濃度變化，控制適當的溫度及濕度，保證切片的質(zhì)量，提高診斷結果的準確率。通過(guò)不斷提高的HE染色技術(shù)，采用不同的固定、脫水、切片，提高了切片的質(zhì)量，顯著(zhù)性的提高了病理診斷的準確率，由于結果的準確，也大大提高了臨床上對針對性疾病的治愈率，為臨床上提供了準確率更高的病理資料。因此，HE 染色技術(shù)是病理診斷、臨床治療過(guò)程中不可或缺的重要檢測手段，通過(guò)診斷結果的準確性，為臨床的治療提供參考依據，具有明顯的臨床價(jià)值。