免疫組化Elivison二步法操作流程
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發(fā)布時(shí)間:2017-09-15
1、石蠟切片置于60℃烘箱中,烘片2h,脫蠟至水,用pH7.4的PBS沖洗三次,每次3min(3×3')。
2、取一定量PH6.0檸檬酸鹽緩沖液,加入微波盒中,微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔微波處理10min,取出微波盒流水自然泠卻,從緩沖液中取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,之后用PBS沖洗2×3'。(注:不是所有的抗體都需要微波修復的,視具體情況而定)
3、每張切片加1滴3% H2O2,室溫下孵育10min,以阻斷內源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3'。
4、除去PBS液,每張切片加1滴相應的第一抗體(相應稀釋倍數),室溫下孵育2小時(shí)。
5、PBS沖洗3×5'。除去PBS液,每張切片加1滴聚合物增強劑(試劑A),室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3'。
6、除去PBS液,每張切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物(試劑B),室溫下孵育30min。PBS沖洗3×5'。
7、除去PBS液,每張切片加1滴新鮮配制的DAB液,顯微鏡下觀(guān)察5min。
8、蘇木素復染,0.1%HCl分化,自來(lái)水沖洗,藍化。
9、切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥(由低濃度到高濃度),二甲苯透明,中性樹(shù)膠封固,晾干后觀(guān)察。