免疫組化Elivison二步法操作流程
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發(fā)布時(shí)間：2017-09-15
1、石蠟切片置于60℃烘箱中，烘片2h，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3min（3×3'）。
2、取一定量PH6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10min，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3'。（注：不是所有的抗體都需要微波修復的，視具體情況而定）
3、每張切片加1滴3% H2O2，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3'。
4、除去PBS液，每張切片加1滴相應的第一抗體（相應稀釋倍數），室溫下孵育2小時(shí)。
5、PBS沖洗3×5'。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強劑（試劑A），室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3'。
6、除去PBS液，每張切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物（試劑B），室溫下孵育30min。PBS沖洗3×5'。
7、除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液，顯微鏡下觀(guān)察5min。
8、蘇木素復染，0.1%HCl分化，自來(lái)水沖洗，藍化。
9、切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥（由低濃度到高濃度），二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固，晾干后觀(guān)察。
