什么是轉錄因子?
l 轉錄因子(Transcription factor,TF)是一類(lèi)能與特異性DNA序列結合并調節基因轉錄的調控蛋白。
l 轉錄因子通常是細胞內信號通路的核心蛋白,是將外界刺激轉化為基因表達變化的關(guān)鍵調控者。
為什么要研究轉錄因子?
l 人體的35000多個(gè)基因在不同的組織、不同的時(shí)間具有表達差異性,轉錄因子的調控起到重要的作用。
l 2012年的諾貝爾生理學(xué)或醫學(xué)獎得主山中伸彌,在小鼠成纖維細胞中表達Oct3/4、Sox2、c-Myc以及Klf4四種轉錄因子,將成纖維細胞逆轉形成多能干細胞(iPS)。
l 轉錄因子與多種人類(lèi)重大疾病相關(guān),比如p53、myc、ER、Id與癌癥相關(guān);MEF2、HIF1與心臟疾病相關(guān);NFκB與炎癥相關(guān);PPAR與肥胖相關(guān)等等。
怎樣用轉錄因子研究為論文加“分”?
加“分”Step1
l 信號通路以及疾病相關(guān)的研究比較容易找到轉錄因子研究的突破口,已有在研項目的研究人員根據自身的研究背景,找準轉錄因子研究突破口。
l 對于還沒(méi)有具體研究思路的科研人員來(lái)說(shuō),轉錄因子研究相對來(lái)說(shuō)容易出結果、容易發(fā)文章,也容易進(jìn)行深入地探索。
加“分”Step 2
l 轉錄因子種類(lèi)繁多,研究比較多同時(shí)也是比較關(guān)鍵的轉錄因子大約有100種。
l 可以使用基因芯片,可以同時(shí)做很多目標蛋白的表達,但是相對來(lái)說(shuō)面比較廣,不會(huì )專(zhuān)門(mén)針對轉錄因子,后期數據分析以及后續目標選擇方面比較困難。
l 推薦一種專(zhuān)門(mén)做轉錄因子的小高通量方法——“多重轉錄因子微孔板陣列檢測試劑”。這個(gè)試劑專(zhuān)門(mén)做轉錄因子的,以標準96孔板微為載體,可以同時(shí)檢測48/96種轉錄因子表達情況,操作過(guò)程跟ELISA實(shí)驗差不多,結果數值化呈現,判讀更直觀(guān)、分析更簡(jiǎn)單。用這個(gè)做就更有針對性一點(diǎn),只做常見(jiàn)的轉錄因子,后續的實(shí)驗安排也更有針對性。
加“分”Step3
l 高通量篩查后,通常要對表達差異的轉錄因子進(jìn)行驗證。
l 驗證方法很多,包括轉錄因子濾板法、EMSA、ELISA以及熒光素酶報告載體等。
l 特別推薦一種適用于大量樣本檢測的“轉錄因子濾板法檢測試劑”,一次實(shí)驗可以檢測96個(gè)樣本中的轉錄因子表達,也可以根據需求靈活調整樣本數量。
加“分”Step4
l 到Step 3,就可以出一篇文章了,想發(fā)表高“分”文章還需要更多深入研究。
l 比如,向上游尋找轉錄因子差異表達的信號傳導途徑,或者向下游探索轉錄因子靶基因表達變化的影響。
l 還可以通過(guò)增大樣本量、樣本種類(lèi)來(lái)提高文章水平。