灌注固定主要用于神經(jīng)系統，其他組織意義不是很大，而且耗時(shí)耗力。對神經(jīng)系統防止變性效果較好！

小鼠灌注：

      灌流固定小鼠時(shí)我一般采用輸液器的針頭(4號半，這樣肉眼可見(jiàn)就是肺部明顯充氣脹大變白，針頭要從心軸方向進(jìn)針，刺入心尖3~4毫米左右就可以了，開(kāi)始灌流后剪破右心耳，約40毫升生理鹽水，后再灌流約20毫升多聚甲醛，整個(gè)灌流固定的過(guò)程就完成了。

大鼠灌注：

      按大鼠體重，用2%戊巴比妥鈉（0.25ml/100g）進(jìn)行腹腔注射麻醉，開(kāi)胸暴露心臟，向左心室內注射1%肝素鈉0.2ml后經(jīng)左心室行主動(dòng)脈插管， 血管鉗固定后剪開(kāi)右心耳，先以生理鹽水150ml快速沖洗血管，然后用4%多聚甲醛的0.01mol/LPBS（4℃，PH7.40）250ml灌注固 定，先快后慢，共需時(shí)間為50min，之后取材，置4%多聚甲醛固定液后固定，在4℃冰箱內保存。多聚甲醛進(jìn)入大鼠體內，大鼠會(huì )出現四肢、尾的抽搐，最終 以肝臟發(fā)白、內臟鼓起即灌注好。

腦組織免疫組化實(shí)驗：

      1. 灌注固定用的針頭，一般都用注射針頭。灌注大鼠一般可用10到12號針頭，小鼠可用6、7號針頭，但很重要的一點(diǎn)是要把針頭的尖端磨鈍而不是用銳利的針頭。（對不起老板了，把我們的秘密都外傳了）。

      2. 關(guān)于穿刺：灌注大鼠時(shí)要把穿刺針的尖端插入到升主動(dòng)脈內，但不宜進(jìn)入升主動(dòng)脈過(guò)長(cháng)，在動(dòng)脈內見(jiàn)到針頭或插入約1mm左右即可；灌注小鼠時(shí)只要把針頭插入左心室內即可，不必要插入到升主動(dòng)脈內。操作的要點(diǎn)是：第一，操作要迅速，剪開(kāi)膈肌后，迅速沿腋前線(xiàn)剪開(kāi)胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露心臟；第二，一定要在明視野下操作，要剪開(kāi)心包壁層的前壁，暴露升主動(dòng)脈和肺動(dòng)脈干的根部，確保穿剌針能進(jìn)入升主動(dòng)脈；第三，穿刺之前要用適當大小的血管鉗夾住心室以固定心臟，但不要夾得過(guò)緊，要讓心腔內留有一定的間隙，然后在心尖處輕輕旋轉針頭插入穿刺針。也可以用小剪刀在心尖處先剪開(kāi)一個(gè)小口再插入穿刺針；第四，穿刺方向要正確，從心尖部開(kāi)始，從左下方斜向右上方，若遇阻力要改變方向再試，不要用力蠻插。

      3. 灌注用生理鹽水的量大鼠用50ml左右，小鼠用10ml左右，一般以從右心耳流出的液體清亮為標準；4%多聚甲醛用量約相當于老鼠體重，如300克的老鼠用300ml左右。小鼠一般用20-30ml。灌注速度先快后慢，可持續1-2個(gè)鐘頭，也可以稍快。取腦后置腦塊于4%多聚甲醛內4度后固定4-6個(gè)鐘頭。

難點(diǎn)與關(guān)鍵點(diǎn)：

      將灌注針插入主動(dòng)脈內是灌注固定的關(guān)鍵，也是難點(diǎn)。首先準確找到主動(dòng)脈，這是此步驟的要點(diǎn)?？捎脺厣睇}水將胸腔內的血液沖洗干凈，用眼科鑷子輕輕夾住心 外膜（夾的越少越好，以免影響取材）將心臟向左上方提起，即可看清主動(dòng)脈，又可使灌注針很容易地插入主動(dòng)脈內。插入時(shí)動(dòng)作要慢，針尖方向不要偏向右側，以 免刺入右心房，如果感到有阻力，則將針退后、調整方向重新進(jìn)針，直到進(jìn)入主動(dòng)脈，灌注針進(jìn)入主動(dòng)脈后可在心臟的上方看到其位置，灌注針進(jìn)入主動(dòng)脈的長(cháng)度最 好為3~5毫米，然后用絲線(xiàn)扎緊。切勿將灌注針?lè )旁谧笮氖覂?，這樣由于主動(dòng)脈瓣的關(guān)閉，灌注液很難進(jìn)入主動(dòng)脈，而是沿著(zhù)心室的切口流出，致使灌注失敗。另 外，灌注針插入成功后，一定要用剪刀剪開(kāi)右心耳而不是右心室，這是灌流液的出口。剪開(kāi)心尖的位置一定要掌握好，不能偏右使灌注針插入右心室。

注意事項：

      1. 針頭大小與動(dòng)物的種類(lèi)有關(guān)，t同時(shí)針頭一定要磨鈍。

      2. 檢查灌注泵的運作情況，一定排出管子的氣泡和空氣，防止空氣栓塞

      3. 經(jīng)腹腔暴露胸腔，先清楚升主動(dòng)脈外面的脂肪組織和心外膜組織

      4. 將針頭經(jīng)左心室插入升主動(dòng)脈（顏色變白的哦），并用鉗子固定

      5. 解開(kāi)右心耳，同時(shí)開(kāi)啟灌注泵。注意，不要隨便揭開(kāi)心臟的其他部位，否則有時(shí)候可能會(huì )灌注成功但是絕大部分會(huì )造成灌注不成功，尤其肺水腫。

      6. 將4度的生理鹽水（最好已動(dòng)物的肝臟發(fā)白為標準，我們實(shí)驗室的大鼠約用250ml）和多聚甲醛(根據所取得材料而定)依次灌入

      7. 整個(gè)過(guò)程均應將動(dòng)物放在冰上，以便于最大程度的保存目的蛋白和酶的活性

   （本文轉載丁香園）