實(shí)驗方法原理
蛙或蟾蜍等兩棲類(lèi)動(dòng)物的一些基本生命活動(dòng)和生理功能與溫血動(dòng)物相似，而其離體組織生活條件易于掌握，在任氏液的浸潤下，神經(jīng)肌肉標本可較長(cháng)時(shí)間保持生理活性，因此，在生理學(xué)實(shí)驗中常用蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌離體標本來(lái)觀(guān)察神經(jīng)肌肉的興奮性、興奮過(guò)程以及骨骼肌收縮特點(diǎn)等。
實(shí)驗材料
蛙
儀器、耗材
蛙板、小玻板各1塊 粗剪刀、直剪刀各1把 大鑷子、小鑷子各1把 眼科剪刀 探針 玻璃分針 大燒杯 小燒杯 滴管 培養皿 棉線(xiàn) 任氏液 鋅銅叉
實(shí)驗步驟
（1）破壞腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來(lái)水沖洗干凈。左手握住蟾蜍，用食指壓住頭部前端使頭前俯，右手持刺蛙針從枕骨大孔向前刺入顱腔（圖1），左右攪動(dòng)搗毀腦組織，然后將刺蛙針退到枕骨大孔，不拔出而是將其尖轉向后插入脊柱管中搗毀脊髓，插入椎管時(shí)，蟾蜍后肢立即失去緊張性，多數情況出現尿失禁。若腦脊髓破壞完全，可見(jiàn)蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。
圖1
（2）剪除上肢和內臟：在骶髂關(guān)節上0.5～1.0cm處用粗剪刀剪斷脊柱。用鑷子夾住后端脊柱，以剪刀沿脊柱兩側剪除所有內臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及緊貼于脊柱兩側的坐骨神經(jīng)（圖2）。
圖2
（3）剝皮：左手用鑷子或直接用手捏住脊柱斷端（注意不要壓迫神經(jīng)），右手捏住斷端邊緣皮膚，向下剝去全部后肢皮膚（圖3），將標本置于盛有任氏液的培養皿中。將手和用過(guò)的器械洗凈后再進(jìn)行以下步驟。
圖3
（4）分離兩腿：用玻璃分針沿脊柱兩側游離出兩條坐骨神經(jīng)，并于近脊柱處各扎一細線(xiàn)，然后在扎線(xiàn)與脊柱之間剪斷神經(jīng)。提著(zhù)神經(jīng)上的細線(xiàn)，將兩條坐骨神經(jīng)分別置于兩條大腿上，左手持脊柱，將骶骨翹起，將下位脊柱全部剪除。捏著(zhù)兩側髂骨向反方向分離，使恥骨聯(lián)合脫臼后，沿恥骨聯(lián)合正中將兩下肢剪開(kāi)，將一條腿浸于任氏液中備用，另一條置于浸有任氏液的玻璃板上。
（5）游離坐骨神經(jīng)和剪斷股骨：認清坐骨神經(jīng)溝和腓腸肌的部位，用剪刀剪斷梨狀肌及其周?chē)慕Y締組織，左手提著(zhù)神經(jīng)上的細線(xiàn)，右手持剪刀或玻璃分針沿坐骨神經(jīng)溝細心剝離，直至將坐骨神經(jīng)剝離到腘窩。將游離干凈的坐骨神經(jīng)放在下腿上，沿膝關(guān)節的周?chē)鷮⒋笸鹊乃屑‰旒魯?，并用剪刀刮凈股骨下段附?zhù)的肌肉，在股骨上1/3處剪去上段股骨及所附的肌肉，這樣制成的稱(chēng)為坐骨神經(jīng)下腿標本（圖4）
圖4
（6）游離腓腸?。涸谧巧窠?jīng)下腿標本的基礎上，用剪刀將跟腱的下端剪斷，在跟腱與肌肉交界處扎一條細線(xiàn)，左手提線(xiàn)，右手用剪刀游離腓腸肌，直到膝關(guān)節。最后用粗剪刀在膝關(guān)節下將小腿剪去，留下的即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標本（圖5）。做好的標本用鋅銅叉的兩極輕輕接觸坐骨神經(jīng)，如腓腸肌立即收縮，表示標本的興奮性良好，然后將標本放入任氏液中，待其興奮性穩定后再進(jìn)行實(shí)驗。
圖5
注意事項
（1）已剝離皮膚的組織避免接觸皮膚毒液或其他不潔物。
（2）分離神經(jīng)時(shí)，一定要用玻璃分針，不能隨便用刀、剪進(jìn)行操作。
（3）不能過(guò)分牽拉神經(jīng)，以免造成損傷。
（4）標本制備過(guò)程中應適當地用任氏液濕潤標本。
（5）避免用手指或金屬器械接觸或夾持標本的神經(jīng)肌肉部分。
（本文轉載丁香園）
