在生化分析測量中，酶的測定比較復雜，要求條件較高，測試比較困難。一般生化分析儀只要酶的測定準確，重復性好，其它項目的測定一般都會(huì )沒(méi)有問(wèn)題?，F就生化分析儀酶分析中常見(jiàn)的測試不準確、重復性差的幾點(diǎn)原因進(jìn)行分析，以供使用者和維修工程師參考。
 
      生化分析儀酶的測定一般用動(dòng)力學(xué)法進(jìn)行測試，其原理是在酶反應的最適條件下，用物理、化學(xué)或酶促反應的分析方法，在反應速度恒定期（零級反應期）來(lái)連續觀(guān)察和記錄一定反應時(shí)間內底物或產(chǎn)物量的變化，以單位時(shí)間酶反應初速度計算出酶活力的大小和代謝物的濃度。零級反應期，指反應速度與底物濃度的零次方成正比，也就是與底物濃度無(wú)關(guān)。在零級反應期期間整個(gè)反應過(guò)程中，反應物可以勻速地生成某個(gè)產(chǎn)物，導致被測溶液在某一波長(cháng)下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度（ΔA/min）與被測物的活性或濃度成正比。計算方法有兩種：
  
1）絕對法：
 
      酶活力(U/L)＝ΔA×(反應液體積/樣品體積)×(1000/消光系數)
  
2）相對法：
 
      (U/L或mmol/L)＝［ΔA(測定)/ΔA(標準)］×標準物的活力或濃度
 
      因此，生化分析儀酶的測定與許多條件有關(guān)。條件的設置，如：波長(cháng)（單波長(cháng)、雙波長(cháng)）、溫度、參數、測試方法，延遲和測試時(shí)間，吸液量等。另外還與廠(chǎng)家的試劑，樣品的采集、保存有關(guān)，同時(shí)與及時(shí)進(jìn)行質(zhì)控，從一個(gè)樣品進(jìn)入另一個(gè)樣品測試時(shí)及時(shí)清洗也有很大關(guān)系。
 
      例如GPT的測試一般選擇為：波長(cháng)為340nm，測定時(shí)間為20秒，延遲時(shí)間為40秒，吸液量為350μl，溫度設定為37℃，試劑空白可任意選擇。
 
      因此GPT的測試結果與以下幾點(diǎn)有關(guān)：
  
      1、340nm為波長(cháng)低端，能量較低，同時(shí)340nm濾光片使用較多，易老化。所以波長(cháng)漂移不準，半寬度變化都會(huì )影響測量的準確度和重復性。
  
      2、動(dòng)態(tài)法測試有延遲時(shí)間，測試時(shí)間要求。延遲時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為預反應時(shí)間，測試時(shí)間在動(dòng)態(tài)法中為測試的總時(shí)間。零級動(dòng)力學(xué)法是針對特定時(shí)間段而言的，酶反應剛啟動(dòng)時(shí)反應比較復雜，雜反應較多，必需經(jīng)過(guò)一段延遲時(shí)間才能進(jìn)入穩定反應期，各試劑商對這兩段時(shí)間有嚴格規定。所以動(dòng)態(tài)法測試一般溫度在37℃，延遲時(shí)間不少于15秒為好。
       
      3、對于參數的輸入應按試劑要求輸入其給定值，一般試劑商在試劑盒說(shuō)明書(shū)中給予說(shuō)明。
      
      4、反應溫度。
       
      5、測試空白要準確。
       
      6、吸液量的大小直接影響交叉污染和測量的重復性，建議測試污染性大的物質(zhì)試劑量應相應增加。一般應大于400μl，一般項目為500μl即可。
        
      7、測試不準確、重復性差從操作上看主要有：儀器本身原因如比色杯中有氣泡；光源燈老化；光源電壓不穩；340nm濾光片性能變差，透射性變??；波長(cháng)不準確等有關(guān)。一般檢查液路接口是否松動(dòng)漏氣，更換光源燈泡和340nm濾光片即可解決。至于電路問(wèn)題，加熱元件損壞，溫度不受控的問(wèn)題只能由工程師解決。
 
      總之酶的測定影響準確度的因素很多，只要認真操作，綜合分析影響測定的各項因素，認真分析，酶測定的問(wèn)題不難解決的。根據我們的經(jīng)驗只要試劑、樣品準確，保存得當，樣品預處理仔細，儀器經(jīng)常維護、保養，認真操作，問(wèn)題會(huì )自行解決。

  （本文轉載丁香園）