一、防止RNA酶污染的措施
1. 所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長(cháng)時(shí)間。
2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）。
3. 有機玻璃的電泳槽等，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室溫10min，然后用0.1% DEPC水沖洗，晾干。
4. 配制的溶液應盡可能的用0.1% DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應當用DEPC處理過(guò)的無(wú)菌雙蒸水配制，然后經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌。
5. 操作人員戴一次性口罩、帽子、手套，實(shí)驗過(guò)程中手套要勤換。
6. 設置RNA操作專(zhuān)用實(shí)驗室，所有器械等應為專(zhuān)用。
二、常用的RNA酶抑制劑
1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過(guò)和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環(huán)結合使蛋白質(zhì)變性，從而抑制酶的活性。
2. 異硫氰酸胍：目前被認為是最有效的RNA酶抑制劑，它在裂解組織的同時(shí)也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中解離出來(lái)，又對RNA酶有強烈的變性作用。
3. 氧釩核糖核苷復合物：由氧化釩離子和核苷形成的復合物，它和RNA酶結合形成過(guò)渡態(tài)類(lèi)物質(zhì)，幾乎能完全抑制RNA酶的活性。
4. RNA酶的蛋白抑制劑（RNasin）：從大鼠肝或人胎盤(pán)中提取得來(lái)的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一種非競爭性抑制劑，可以和多種RNA酶結合，使其失活。
5. 其它：SDS、尿素、硅藻土等對RNA酶也有一定抑制作用。因為DEPc不加選擇的修飾蛋白質(zhì)和RNA，因此在分離和純化RNA過(guò)程中不能使用，而且它與一些緩沖液(例如Tri)不能相容。
在所有RNA實(shí)驗中，最關(guān)鍵的因素是分離得到全長(cháng)的RNA。而實(shí)驗失敗的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。RNA酶可耐受多種處理而不被滅活，如煮沸、高壓滅菌等。
研究人員造成的污染 RNA酶最主要的潛在污染源是研究人員的手。因此進(jìn)行RNA實(shí)驗時(shí)應勤換手套。但DEPC能與胺和巰基反應,因而含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。
三、動(dòng)植物總RNA提取-Trizol法
Trizol法適用于人類(lèi)、動(dòng)物、植物、微生物的組織或培養細菌，樣品量從幾十毫克至幾克。用Trizol法提取的總RNA絕無(wú)蛋白和DNA污染。 RNA可直接用于Northern斑點(diǎn)分析，斑點(diǎn)雜交， Poly(A) 分離，體外翻譯，RNase封阻分析和分子克隆。
1、將組織在液N中磨成粉末后，再以50-100mg組織加入1ml Trizol液研磨，注意樣品總體積不能超過(guò)所用Trizol體積的10%。
2、研磨液室溫放置5分鐘，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，蓋緊離心管，用手劇烈搖蕩離心管15秒。
3、取上層水相于一新的離心管，按每mlTrizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇，室溫放置10分鐘，12000g離心10分鐘。
4、棄去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，渦旋混勻，4℃下7500g離心5分鐘。
5、小心棄去上清液，然后室溫或真空干燥5-10分鐘，注意不要干燥過(guò)分，否則會(huì )降低RNA的溶解度。然后將RNA溶于水中，必要時(shí)可55℃-60℃水溶 10分鐘。RNA可進(jìn)行mRNA分離，或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。
[注意]
1、整個(gè)操作要帶口罩及一次性手套，并盡可能在低溫下操作。另外，提取上清這步一定要小心，靠近沉淀的部分一定要舍得不要，要不然會(huì )有蛋白質(zhì)污染，影響比值。
2、加氯仿前的勻漿液可在-70℃保存一個(gè)月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。
（本文轉載丁香園）
