一、 生命科學(xué)中的“釣魚(yú)”（ FISH ）技術(shù) 

 二、 顯微鏡基礎知識及顯微照相技術(shù) 

 三、 Qbiogene 熒光原位雜交的新型探針 
       

       研究用探針
       a 、人衛星 DNA 直接染色探針
       b 、人染色體著(zhù)色探針
       c 、人端粒特異特 DNA 探針
       d 、小鼠染色體探針
       e 、微切除探針
       f 、特異性位點(diǎn)探針 
      

       臨床用探針
       a 、產(chǎn)前診斷 
       b 、腫瘤，血液病及其他疾病

四、 熒光標記 試劑 及 試劑 盒
        a 、標記試劑
        b 、檢測試劑
        c 、熒光標記試劑盒 

 

五、 顯微鏡濾鏡 

 

六、熒光原位雜交相關(guān)設備 
 
一、生命科學(xué)中的“釣魚(yú)”（ FISH ）技術(shù)

 

      熒光原位雜交技術(shù)（ fluorescence in situ Hybridization,FISH ）是一種非放射性原位雜交方法，用特殊的熒光素標記 DNA 探針，在染色體、細胞或組織切片標本上進(jìn)行 DNA 雜交，以檢測細胞內 DNA 或 RNA 特定序列存在與否。近年來(lái)隨著(zhù) FISH 所應用的探針?lè )N類(lèi)的不斷增多， FISH技術(shù)不僅在細胞遺傳學(xué)方面，而且還廣泛應用于腫瘤的診斷、基因定位等。原有的放射性同位素原位雜交技術(shù)存在許多缺點(diǎn)，如每次檢測需要重新進(jìn)行標記，標記步驟繁瑣，標記的探針不穩定，需要較長(cháng)時(shí)間的曝光，并且對環(huán)境造成污染，在觀(guān)察結果時(shí)，需要較多的細胞分裂相。此外，由于放射性銀粒和染色體聚集在不同平面，可能引起計數上的誤差。

 

      與之比較， FISH 則具有其不可比擬的優(yōu)點(diǎn)：

      1.操作簡(jiǎn)便，一步式反應，能迅速得到結果，一次標記后可使用二年。 方法敏感，敏感程度等同甚至超過(guò)放射性同位素原位雜交。 在同一標本上，可同時(shí)應用幾種不同探針，標記不同的顏色。

      2.可用于分裂細胞和靜止期細胞的染色體數量及基因改變的研究。

      3.熒光原位雜交技術(shù)可以傳統技術(shù)完美結合： FISH 和細胞免疫化學(xué)技術(shù)結合，可以同時(shí)用多種不同顏色標記不同的核苷酸鏈和蛋白質(zhì)，這樣可以在單個(gè)細胞內同時(shí)找到基因的位點(diǎn)，轉錄和翻譯的產(chǎn)物，有助了解核苷酸結構功能以及與蛋白質(zhì)表達之間的關(guān)系。 FISH 技術(shù)和 RFLE （ RESTRICT FRAGMENT LENTH POLYMORPHSIM ）結合，可以精確地描述染色體長(cháng)，短臂等結構改變和染色體核型或復雜片段的性質(zhì)。在基因圖譜繪制中， FISH 和 Linkage mapping 結合起來(lái)即使對具有高度多形態(tài)的基因位點(diǎn)也能較精確地確定下來(lái)。

 

二、顯微鏡及顯微照相技術(shù)

 

      熒光信號在高壓汞燈的短波激發(fā)光下，常引起熒光信號發(fā)生淬滅，為防止淬滅的發(fā)生，需要將 DAPI 或 PI 稀釋于 P － Phenlenediomine 的甘油緩沖液中。對于單拷貝探針的信號需要質(zhì)量較好的熒光顯微鏡。如采用雙色或多色濾光片可以同時(shí)觀(guān)察 FITC 、 TEXAS － RED 等多種顏色的 FISH 信號。不論是染色體還是單拷貝基因的 FISH 信號均可用高度敏感和高分辨率的彩色膠片攝取，也可通過(guò) CCD （ chargecoupled device ）的照片系統或 LASER SCANNING IMAGING SYSTERM （激光掃描共焦成像系統）交攝取的信號儲存在計算機內，經(jīng)軟件處理后，將信號疊加顯示在熒光屏上。

 

      由于有多種方法標記 DNA 探針，幫一次雜交可以同時(shí)觀(guān)察多個(gè)探針的信號，如兩個(gè)不同的探針?lè )謩e用 BIOTIN 和 DIGOXIGENIN 標記，雜交后用 AVIDIN － FITC 和抗－ DIG － TEXAS － RED 分別與探針上的 BIOTIN 和 TEXAS － RED 信號。采用三種或三種以上不同的半抗原，如 BIOTIN 、 DIG 和 DNP 等標記探針，然后用多種不同顏色的熒光素，如 FITC （綠色）， RHODAMINE （紅色）， CASCADE BLUE （蘭色）等結合進(jìn)行，可同時(shí)得到多種不同顏色的熒光信號。

 

      同上于常規的熒光顯微鏡的熒光顯微鏡的照像，彩色膠片不易多曝光，限制了這種聯(lián)合標記探針的應用，使用 DIGITAL IMAGING CAMERA SYSTEM 或 CCD 照像系統，先分別多次攝取灰色的影像關(guān)儲存在計算機內，而后冠以人為的顏色，運用軟件系統融合各次得到的影像，最終形成一個(gè)復合的多顏色的圖像。

 

      對已做過(guò) G 顯帶的染色體片子，用 75 ％ 的乙醇或甲醇褪色后，可使 FISH 更清晰的辨認各條染色體及染色體結構異常（包括某些復雜的易位，插入，倒位等）。 FISH 和 G 顯帶技術(shù)結合，不僅可以用新近 G 帶處理過(guò)的片子，而且還可用陳舊的 G 帶片子。因些， FISH 技術(shù)可成功的幫助細胞遺傳學(xué)家做回顧性分析。

 

  （本文轉載丁香園）