內毒素即革蘭陰性菌細胞壁中的脂多糖(LPS),存在于細菌的細胞外膜,當細菌死亡后,細胞膜破裂就釋放出來(lái),由核心多糖、側翼多糖及脂A組成,體積微小,其粒徑約在1~ 5毫微米(Nanotex nm,為千分之一微米1×10-3m m),一般認為其分子量在1000以上。具有水溶性、不揮發(fā)性、不帶有正電性和負電性等特征。其耐熱性,一般在60℃加熱1小時(shí)無(wú)影響,100℃不裂解,120℃加熱四小時(shí)能破壞98%,180-200℃干熱2小時(shí)或250℃加熱半小時(shí)才能完全破壞。
內毒素生物學(xué)活性多種多樣,在體內作用錯綜復雜,參與了機體許多病理生理反應過(guò)程。內毒素可以誘發(fā)機體炎癥因子的過(guò)度釋放,導致系統性炎癥反應綜合癥、多器官衰竭,死亡率很高,占死因的50-70%。
戰友sunfeisunfei曾經(jīng)試過(guò)從大腸桿菌中提取粗制內毒素,用的方法是反復加熱、凍存法,但是效果不是理想。具體方法是將大腸桿菌在2個(gè)大氣壓下(因具體條件限制,我只是在1.2個(gè)氣壓左右),蒸汽滅菌30min,后-20度凍存24小時(shí),反復3次,即可。
戰友ljksbs介紹,目前,市面上有賣(mài)從轉染后的質(zhì)粒DNA溶液中提取內毒素的試劑盒(因為,轉染后質(zhì)粒DNA溶液若含有內毒素,可能導致轉染的失?。?,其也可以從細菌死亡裂解后的溶液中提取內毒素。
戰友shmilyth說(shuō),傳統的內毒素提取方法就是加熱菌液或用其它方法使細菌裂解,然后用特殊石棉濾板過(guò)濾即可。
戰友xuezhishui認為,純化重組蛋白的時(shí)候經(jīng)常需要去除內毒素,當然同樣的操作也可以提取內毒素。