1. 應該在細胞狀態(tài)最好的時(shí)候，進(jìn)行病毒接種或復蘇；

     2. 接種前頭天，進(jìn)行細胞傳代，細胞數量應以能讓細胞在第二天內達到覆蓋滿(mǎn)90%的培養瓶為準，并且一定要在細胞傳代后48h內接種病毒；

     3. 第二天細胞長(cháng)為單層且狀態(tài)較好時(shí)，開(kāi)始接種病毒；

     4. 先移棄培養瓶中的生長(cháng)液，用1*PBS輕輕洗細胞面3次，最后用移液管吸干凈培養瓶中殘留的1*PBS。為保持培養瓶中pH環(huán)境的穩定，及減少1*PBS對細胞的刺激作用，可再用生長(cháng)液輕輕洗細胞面1次移棄液體,并用移液管吸干凈瓶中殘留生長(cháng)液;

     5.接種病毒；

     ① 一般種毒量按最后所需加入維持液體積的10%，15%或20%來(lái)計算，一般10%即可，若希望病變速度快一些，可以加大種毒量，如15%或20%；

     ② 如果用小塑料瓶種毒。一般該培養瓶加8-9ml培養液，加入0.8ml病毒即可。病毒加入后，蓋上瓶塞，輕輕將搖晃瓶子，讓病毒液在細胞面上來(lái)回10幾次；

     ③ 在對照細胞中，加入相同的0.8ml維持液；

     6. 將種毒瓶和對照瓶一起放入37℃，CO2烘箱培養1h。其中每隔15min，需要將種毒瓶和對照瓶拿出，輕輕搖晃瓶子，保證病毒液或維持液能在細胞面上來(lái)回20-30次，使病毒液或維持液能充分接觸細胞；

     7.1h后，在晃動(dòng)瓶子4次后，重新進(jìn)入無(wú)菌間，在培養瓶中加入維持液；

     ① 維持液配方一

     MEM 2鸖 3%谷氨酰胺 1%雙抗 NaHCO 3(其用量以調節pH至7.0為準,濃度為6%)

     ② 維持液配方二

     MEM 3%谷氨酰胺 1%雙抗 NaHCO 3(其用量以調節pH至7.0為準,濃度為6%)；

     ③ 一般還是使用有FBS的維持液，因為對細胞有一定的保護作用；

     8. 將加完維持液的培養瓶放回37℃，CO2烘箱培養，每天觀(guān)察，如果有條件，可以每天拍照，直到有90%的細胞出現CPE后，可以進(jìn)行收毒；

     9. 收毒可以用反復凍融方法:即將細胞培養瓶放入-20℃冰箱，凍起來(lái)后，直接拿出來(lái)等起融化后，使勁搖晃瓶子，讓細胞破裂釋放出病毒顆粒，這樣反復4次,即可達到收毒目的；

     10. 收毒后的病毒液可以用移液管吸入離心管，在1,000-2,000轉下離心10mins，以此除去細胞碎片，將離心后的上清夜轉移，棄底部沉淀，該上清液即可用于病毒濃縮醇化，或病毒滴度測定,或中和試驗等。