冷凍干燥保藏法

    （1）準備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形狀可用長(cháng)頸球形底的，亦稱(chēng)淚滴型安瓿管（圖Ⅶ-15），大小要求外徑6—7．5mm，長(cháng)105mm，球部直徑9—11mm，壁厚0．6—1．2mm。也可用沒(méi)有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1．05kg/cm2，121．3℃滅菌30分鐘，備用。

    （2）準備菌種，用冷凍干燥法保藏的菌種，其保藏期可達數年至十數年，為了在許多年后不出差錯，故所用菌種要特別注意其純度，即不能有雜菌污染，然后在最適培養基中用最適溫度培養，使培養出良好的培養物。細菌和酵母的菌齡要求超過(guò)對數生長(cháng)期，若用對數生長(cháng)期的菌種進(jìn)行保藏，其存活率反而降低。一般，細菌要求24—48小時(shí)的培養物；酵母需培養3天；形成孢子的微生物則宜保存孢子；放線(xiàn)菌與絲狀真菌則培養7—10天。

    （3）制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例，用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中，制成濃菌液，每支安瓿管分裝0．2ml。

    （4）冷凍干燥器有成套的裝置出售，價(jià)值昂貴，此處介紹的是簡(jiǎn)易方法與裝置，可達到同樣的目的。將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍，無(wú)低溫冰箱可用冷凍劑如干冰（固體CO2）酒精液或干冰丙酮液，溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑，只需冷凍4—5分鐘，即可使懸液結冰。

    （5）真空干燥為在真空干燥時(shí)使樣品保持凍結狀態(tài)，需準備冷凍槽，槽內放碎冰塊與食鹽，混合均勻，可冷至-15℃。裝置儀器如圖Ⅶ-16，安瓿管放入冷凍槽中的干燥瓶?jì)取?/span>抽氣一般若在30分鐘內能達到93．3Pa（0．7mmHg）真空度時(shí)，則干燥物不致熔化，以后再繼續抽氣，幾小時(shí)內，肉眼可觀(guān)察到被干燥物已趨干燥，一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg），保持壓力6—8小時(shí)即可。

    （6）封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管（圖Ⅶ-17）繼續抽氣，約10分鐘即可達到26．7Pa（0．2mmHg）。于真空狀態(tài)下，以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進(jìn)行封口。封口以后，保存于冰箱或室溫暗處。