血清學(xué)反應是指相應的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現肉眼可見(jiàn)的沉淀或凝集現象。在微生物檢驗中，常用血清學(xué)反應來(lái)鑒定分離到的細菌，以最終確認檢測結果，是臨床細菌性疾病診斷和病原菌鑒定的重要手段之一。血清學(xué)試驗可分為血清學(xué)鑒定和血清學(xué)診斷兩部分。用已知抗體(即含特異抗體的免疫血清或單克隆抗體等)檢測標本中或分離培養物中未知細菌的種、型或細菌抗原，稱(chēng)為血清學(xué)鑒定；而用已知細菌或特異性抗原檢測患者血清中有無(wú)相應抗體及其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，作為某些感染性疾病的輔助診斷，稱(chēng)為血清學(xué)診斷。血清學(xué)試驗基本類(lèi)型包括凝集反應、沉淀反應和補體結合反應等。

一、玻片凝集試驗

【實(shí)驗目的】
 
1. 掌握玻片凝集試驗的操作方法，了解其特點(diǎn)和用途。
 
2. 學(xué)習玻片凝集試驗結果的觀(guān)察方法。

【實(shí)驗原理】
 
當顆粒性抗原與相應抗體特異結合后，在適量電解質(zhì)存在的條件下，可逐漸聚集，出現肉眼可見(jiàn)的凝集現象。

【試劑與器材】
 
1． 診斷血清：1∶10稀釋的傷寒桿菌診斷血清。
 
2． 菌種：傷寒桿菌、痢疾桿菌24 h瓊脂斜面培養物。
 
3． 器材：載玻片、毛細吸管。
 
4． 試劑：生理鹽水。
 
【實(shí)驗方法與步驟】
 
1． 取清潔玻片一張，用蠟筆劃為三格，并注明號碼。無(wú)菌操作下，用接種環(huán)于1、2格內加1∶10稀釋傷寒桿菌診斷血清1～2滴，第三格加1～2滴生理鹽水。
 
2． 無(wú)菌操作下，用接種環(huán)取傷寒桿菌培養物少許，混于第三格中，再混于第一格中（不能先混第一格再混第三格，因為這樣將使診斷血清混入鹽水而影響對照結果），將細菌與鹽水或血清混合均勻使呈乳狀液。此時(shí)取菌量不可過(guò)多，使懸液呈輕度乳濁即可。
 
3． 同法取痢疾桿菌培養物少許，于第二格內混勻。

4． 輕輕搖動(dòng)玻片，經(jīng)1～2min后肉眼觀(guān)察，出現乳白色凝集塊者，即為陽(yáng)性反應；仍為平等的乳濁液者，即為陰性反應。如結果不夠清晰，可將玻片放于低倍顯微鏡下觀(guān)察。

二、試管凝集反應——肥達反應

【實(shí)驗目的】
 
1. 掌握肥達的操作方法，了解其特點(diǎn)和用途。
 
 2. 學(xué)習肥達反應結果的觀(guān)察方法。

【實(shí)驗原理】
 
 試管凝集反應是一種半定量的凝集反應。常用已知抗原測定受檢血清中有無(wú)相應抗體及其含量，以輔助臨床診斷或供流行病學(xué)調查分析。

【試劑與器材】
 
1． 診斷血清：1∶10稀釋傷寒桿菌“H”血清、1∶10稀釋傷寒桿菌“O”血清。
 
2． 菌液：傷寒桿菌“H”菌液、傷寒桿菌“O” 菌液。
 
3． 試劑：生理鹽水。
 
4． 器材：小試管、吸管。

【實(shí)驗方法與步驟】
 
1． 取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上，每排7只依次用蠟筆注明號碼，于每管中分別加入0.5 ml生理鹽水。
 
2． 在第1排第1管中加入1∶10稀釋傷寒“H”血清0.5 ml，使血清與鹽水充分混合，而后吸出0.5 ml注入第2管，同樣予以混勻后吸出0.5 ml注入第3管。以此類(lèi)推，稀釋到第6管，自第6管吸出0.5 ml棄去。此時(shí)，自第1管至第6管的血清稀釋倍數為1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640。第7管不加血清作為對照。
 
3． 同法用吸管吸取1∶10稀釋傷寒桿菌“O”血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀釋。
 
4． 用移液管吸取傷寒桿菌“H”菌液，加入第1排各管中每管0.5 ml，此時(shí)血清稀釋倍數又增加了一倍。
 
5． 同法于第2排各管中加入傷寒“O”菌液0.5 ml。
 
6． 將各管振蕩混勻，放37℃水浴箱中2~4h或37℃孵育箱中過(guò)夜，次日取出觀(guān)察結果。

【觀(guān)察結果】
1． 對照管無(wú)凝集現象，管內液體仍呈混濁狀態(tài)。但如放置時(shí)間較長(cháng)，細菌堆于管底成小圓點(diǎn)狀，為陰性反應。
 

2． 試驗管與對照相比可見(jiàn)管底有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物，上清則澄清透明或不同程度混濁。凝集的強弱可用“+”號表示如下：