在實(shí)驗中我們經(jīng)常會(huì )需要自己配置RPMI1640培養基，在配置的過(guò)程中需要注意哪些？哪些因素會(huì )影響到RPMI1640培養基的配置效果呢?生物幫為您盤(pán)點(diǎn)了配制RPMI1640培養基13點(diǎn)需知，詳情請看下文：

     1)配制培養基最好使用新制備的三蒸水。一般在試驗前當天或前一天制備為好。調節pH值的酸堿溶液也應該使用這種水配制。

     2)培養液配好后，應先抽取少許放入培養瓶?jì)?，?/span>37℃溫箱內置24～48hr，以檢測培養液是否有污染。

     3)溶解培養基：將干粉培養基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內面兩次，倒入培養液中。振蕩或超聲助溶，一般不要加熱助溶。

     4) 補加試劑：根據包裝袋說(shuō)明和試驗需要加入NaHCO3(2.0g)、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等其他試劑。

     5) 加抗生素：一般抗生素終濃度為――青霉素100U/ml，鏈霉素100U/ml。市售青霉素為80萬(wàn)U/瓶，可溶于4ml體積，每一升培養液中加0.5ml即可。市售鏈霉素為100萬(wàn)U/瓶，可溶于5ml體積，每一升培養液中也加0.5ml即可。無(wú)鏈霉素的情況下，用慶大霉素代替，終濃度調為50～200U/ml。

     6) 調pH值：加水到900ml(在需要加10%小牛血清的情況下)，然后用5% NaHCO3調節pH到7.2。

     7) 過(guò)濾除菌：宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，以保證過(guò)濾效果。注意濾膜正面(光面)朝上。過(guò)濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。

     8) 加小牛血清：根據培養基配制的量將小牛血清分裝，冷凍保存(-20℃)。臨用前將加入小牛血清(10%~20%)。

     9)每次配液時(shí)，需要的其他輔助性液體(Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS ，抗生素溶液等)也可以同時(shí)配制，分別過(guò)濾。

     10)市售小牛血清使用前都應該滅活(56℃，30min)，以消除補體活性。動(dòng)物血清個(gè)體差異大，故而每一批血清都進(jìn)行嚴格檢測，同時(shí)進(jìn)行無(wú)菌試驗。優(yōu)質(zhì)血清應該為淡黃色，透明，無(wú)溶血，無(wú)沉淀，滅活后顏色稍深。生化檢測總蛋白含量3.5~4.5g/100ml，球蛋白不高于2g/100ml。選定一個(gè)效果較好的批號后，可一次多購該批號的血清，保證試驗條件的穩定。

     11)由于市售小牛血清pH未知，但大多偏酸。試驗中加入小牛血清后，培養基的pH可能還會(huì )變化，故亦可先加入小牛血清后調pH值。但此種方法過(guò)濾較困難，只適于正壓過(guò)濾。

     12)每次配液量以?xún)芍茏笥覟橐?，一次配液不要太多，防止營(yíng)養成分(主要為谷氨酰胺)損失，造成實(shí)驗繁瑣或者污染。

     13)最后，制備培養基的器皿清洗要絕對干凈，烤干后備用(濾器 、濾膜、量筒、移液管及盛放培養基的小瓶等存放和轉移培養基液體的器具都應進(jìn)行滅菌)。

     PS：用了那么就RPMI-1640，可是你當真知道它的由來(lái)嗎?RPMI是Roswell Park Memorial Institute的縮寫(xiě)，代指洛斯維公園紀念研究所。RPMI是該研究所研發(fā)的一類(lèi)細胞培養 基，1640是培養基代號。

     RPMI1640培養基的配置步驟和配置過(guò)程需要注意的事項大家都比較清楚了，在實(shí)際的配置過(guò)程中要按照相關(guān)標準來(lái)配置，把握好量和度，特別是污染要嚴格控制，才能更好更快的配制出RPMI1640培養基。