細胞傳代:當細胞在細胞培養瓶?jì)乳L(cháng)滿(mǎn)達到80%時(shí)就要傳代,一傳二,24小時(shí)后再傳代。48小時(shí)傳就不好了,如果在24小時(shí)后細胞沒(méi)有長(cháng)到80%,應該換新的培養基,不然,培養基變黃,細胞脫落。
細胞消化:將細胞培養瓶豎立放置,吸走培養基,如果培養基中的脫落細胞較多,說(shuō)明細胞現在很容易脫落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),來(lái)回輕微晃動(dòng)培養瓶直到細胞完全脫落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混勻,不能吹打,分裝2瓶,如果細胞沒(méi)長(cháng)滿(mǎn)就脫落,則只需加入5mlMEM,不分裝。如果培養瓶中的細胞貼壁較牢固,培養基上清沒(méi)有細胞脫落碎片,且細胞長(cháng)滿(mǎn)達到80%以上,吸走培養基,加入5ml的PBS+EDTA(0.02%),迅速輕微晃動(dòng),豎立培養瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超過(guò)3min,細胞完全消化脫壁,取出加入10ml培養基輕微吸打混勻,分裝2瓶。
培養基:MEM(GIBCO)+10%胎牛血清(杭州四季青)+雙抗