一、 定義:

   1)一種遺傳標記，包括單個(gè)堿基的缺失和插入，更多情況是單個(gè)堿基的置換。

   2)通常情況下是一種二等位基因的變異，多為轉換，即一種嘧啶堿基換為另一種嘧啶堿基，或一種嘌呤堿基換為另一種嘌呤堿基，轉換與顛換之比為2：1。

   3)SNP在CG序列上出現最為頻繁，而且多是C→T，因為CG中C即胞嘧啶常為甲基化的，自發(fā)脫氨后即變?yōu)樾叵汆奏ぁ?/span>

   4)人類(lèi)基因組SNP位點(diǎn)的數量：目前的估計不完全相同，有人估計每400bp就有一個(gè)堿基不同；另一 些人則估計變異頻率在0.5‰--10‰。如果假定1/1000的堿基是多態(tài)，那么人類(lèi)30億堿基中就有300萬(wàn)SNP位點(diǎn)。

   5)SNP的分布不均勻，非轉錄序列中要多于轉錄序列，絕大多數位于蛋白的非編碼區。

   6)重要性：雖然SNP 不及RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism）和短串聯(lián)重復序列STR標記變異程度高，但由于數量巨大，分布頻密，因此就整體而言，其多態(tài)性要高得多。

   7)檢測方便：大多為二態(tài)，便于自動(dòng)化批量檢測。

二、 方法

   DNA序列分析（DNA sequencing） 應用各種突變檢測技術(shù)檢測到的基因突變，最后都需用序列分析才能確定突變類(lèi)型及突變位置，其效率可以達到100％，主要有兩種方法：

   1,測序法：現在的測序方法已與經(jīng)典的方法 有了很大的不同，其基本原理雖仍是雙脫氧終止法，但自動(dòng)化程度大為提高，操作更簡(jiǎn)便，測序時(shí)間也大大縮短。隨著(zhù)PCR技術(shù)與測序聯(lián)合使用，不需經(jīng)過(guò)M13亞克隆步驟，故稱(chēng)為直接測序法（direct sequencing,DS）。

   2,探針?lè )ǎ簩?shí)驗原理：探針只與模板特異性地結合，其結合位點(diǎn)在兩條引物之間。探針的5′端標記有報告基團(Reporter, R)，如FAM、VIC等，3′端標記有熒光淬滅基團(Quencher, Q)，如TAMRA等。當探針完整的時(shí)候，報告基團所發(fā)射的熒光能量被淬滅基團吸收，儀器檢測不到信號。隨著(zhù)PCR的進(jìn)行，Taq酶在鏈延伸過(guò)程中遇到與模板結合的探針，其5′→3′外切核酸酶活性就會(huì )將探針切斷，報告基團遠離淬滅基團，其能量不能被吸收，即產(chǎn)生熒光信號。在探針的5’端使用不同的Report熒光基團，單一PCR中可以檢測到多個(gè)探針的雜交與相應熒光。只有與模板完全匹配的TaqMan探針在與等位基因發(fā)生特異性雜交后，利用Taq酶的5’外切酶活性作用使得探針的5’Report熒光能夠被檢測。

  我已經(jīng)為大量客戶(hù)進(jìn)行了基因突變分析檢測技術(shù)服務(wù)，公司技術(shù)人員擁有豐富的相關(guān)經(jīng)驗。

實(shí)驗步驟如下：

   (1)客戶(hù)收集標本(血液或組織等標本);

   (2)確定基因突變SNP位點(diǎn), 設計合成特異PCR擴增普通引物及探針,并在NCBI網(wǎng)站做BLAST;

   (3)進(jìn)行PCR擴增,擴增產(chǎn)物通過(guò)測序儀測序或通過(guò)SNP分型獲得實(shí)驗報告;

   (4)分析報告,給出實(shí)驗結果;