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細胞瞬時(shí)轉染

     原理:

 

     通過(guò)脂質(zhì)體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術(shù),將靶基因導入細胞,一般在轉染后48小時(shí)左右,靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實(shí)驗目的,48小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達的檢測等實(shí)驗。 

 

     應用:

 

     觀(guān)察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能(短時(shí)間即可進(jìn)行觀(guān)察,但效應會(huì )很快丟失)。

 

     一般流程:

 

     1)細胞接種:轉染實(shí)驗前天接種細胞,各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長(cháng)率和細胞形狀而定。進(jìn)行轉染當天細胞密度應達到60%~80%覆蓋。

 

     2)細胞轉染(脂質(zhì)體、電穿孔、FuGENE6等)

 

     3)48小時(shí)以后鑒定目的基因的表達情況。

 

     前期準備:

 

     構建好的外源基因載體,或目的基因基本信息。

 

     待轉染的細胞系(1×106個(gè)細胞,可傳代,倍增時(shí)間小于48小時(shí))以及細胞培養條件的說(shuō)明。

 

     若需要檢測靶基因的表達,請提供相應抗體。

 

     結果呈現:

 

     構建好的瞬時(shí)轉染細胞及相關(guān)的外源基因表達分析。

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