引物序列的特異性是決定PCR特異性擴增的主要因素?，F在我們常用引物設計軟件來(lái)進(jìn)行引物設計，但如注意到以下條件將會(huì )事半功倍

    （1）引物長(cháng)度在15～30 bp為佳，過(guò)長(cháng)的引物與模板復性雜交速率減慢，降低擴增效率，過(guò)短則會(huì )降低特異性。

    （2）引物內部不應形成二級結構，兩引物之間不能互補。

    （3）堿基應隨機分布，（G+C）%最佳含量在45%～55%，應避免4個(gè)以上的相同堿基排列。

    （4）引物3’端和模板的堿基最好完全配對，而引物3’端最后5～6個(gè)核苷酸與模板的錯配應盡可能少。

    （5）引物3’端堿基最好是T、G、C而不是A，這樣會(huì )有利于延伸。

  
    （6）可在引物5’端添加不與模板互補的額外序列以便于后續分析。

     （本文轉載丁香通）