蘇木精-伊紅染色方法,簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色方法,是生物學(xué)和醫學(xué)的細胞與組織學(xué)最廣泛應用的染色方法。在病理學(xué)實(shí)驗室中稱(chēng)為常規染色方法。病理細胞和組織學(xué)的診斷,教學(xué)和研究都是用HE染色方法觀(guān)察正常和病變組織的形態(tài)結構。因此病理學(xué)工作者必需學(xué)習和掌握這種染色方法。
(一)HE染色的基本原理
1.細胞核染色的原理
細胞核內的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結構中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵或氫鍵結合而染色。蘇木精在堿性染料中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
2.細胞漿染色的原理
細胞漿內主要成分是蛋白質(zhì),在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽(yáng)離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽(yáng)離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。伊紅是細胞漿的良好染料。
隨著(zhù)科學(xué)技術(shù)快速發(fā)展和電子計算機的廣泛應用,染色自動(dòng)儀器的出現,許多實(shí)驗室已用全自動(dòng)染色機代替人工染色。
(二)人工操作蘇木精伊紅染色方法
1.染色步驟
二甲苯I脫蠟10min.
二甲苯II脫蠟5min。
無(wú)水乙醇洗去二甲苯1min×2次。
95%酒精1min。
90%酒精1min。
85%酒精1min。
自來(lái)水洗2min。
蘇木精染色1min至5min。
自來(lái)水洗1min。
1%鹽酸酒精分化20s。
自來(lái)水洗1min。
稀氨水(1%)反藍30s。自來(lái)水洗或蒸餾水洗1min。
伊紅染色20s至5min。
自來(lái)水洗30s。
85%酒精脫水20s。
90%酒精30s。
2.染色結果
細胞核呈藍色,細胞漿、肌肉、結締組織、紅細胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍色或紫藍色。
(三)染色液的配制
1.蘇木精(素)
蘇木精是一種純天然染料,是從蘇木素樹(shù)提煉出來(lái)的,蘇木樹(shù)主產(chǎn)墨西哥的坎偑切,蘇木精的染色性能差,經(jīng)過(guò)一百多年精心加工配制,現用的蘇木精配方,染色性能好,保持時(shí)間長(cháng),是世界上唯一的常規細胞核染料,
2.蘇木精的配制
蘇木精的配方很多,可根據不同需要選用,Harris配方最常用。
(1)Harris蘇木精的配制
蘇木精1g
硫酸鋁鉀15g
無(wú)水乙醇10ml
蒸餾水200ml
先用蒸餾水加熱溶解硫酸鋁鉀,用無(wú)水乙醇溶解蘇木精再倒入已溶解的硫酸鋁鉀蒸餾水中,煮沸1min后,稍冷卻,慢慢加入紅色氧化汞0.5g,繼續加熱至染液變?yōu)樽霞t色,用紗布蓋瓶口,用前濾紙過(guò)濾后每100ml加冰醋酸5ml。
(2)Mayer蘇木精改良配法
A液
蘇木精2g
無(wú)水乙醇40ml
B液
硫酸鋁鉀100g
蒸餾水600ml
稍加熱使硫酸鋁鉀在水中溶解,將蘇木精溶于酒精中,再將A液與B液混合煮沸2min。用蒸餾水補足600ml,加入400mg碘酸鈉充分混勻,蘇木精染液呈紫紅色。
(3)Gill改良蘇木精染液的配制
蘇木精2g
無(wú)水乙醇250ml
硫酸鋁鉀17g
蒸餾水750ml
碘酸鈉0.2g
冰醋酸20ml
先將蘇木精溶于無(wú)水乙醇,再將硫酸鋁鉀溶于蒸餾水中。兩液溶解后將其混合,加入碘酸鈉待蘇木精氧化成紫紅色,再加入冰醋酸。
3.伊紅溶液的配制
(1)水溶性伊紅
伊紅Y0.5-1g
蒸餾水100ml
先將水溶性伊紅加入蒸餾水中,用玻璃棒將伊紅攪起泡沫后過(guò)濾,每100ml加冰醋酸1滴。
(2)乙醇性伊紅液的配制
伊紅Y 0.5~1g
90%酒精100ml
先將伊紅溶于酒精中,用玻璃棒研碎溶解后,每100ml加冰醋酸1滴。用乙醇性伊紅液染細胞漿后不可經(jīng)水洗直接用85%酒精脫水。
4.鹽酸酒精分化液的配制
濃鹽酸0.5~1ml
75%酒精99ml
此液用一段時(shí)間后需要延長(cháng)或更換液體,新液分化時(shí)間要短。
(本文轉載丁香通)