此步驟在技術(shù)員協(xié)助下由病理醫師完成。取材的好壞，直接影響切片的質(zhì)量。醫生在取材時(shí)，首先要有一把鋒利的取材刀，在切割組織時(shí)要避免取材刀來(lái)回拖拉，切取的組織塊厚薄要均勻，一般厚度以0.2 ～0.3cm為適，較容易發(fā)脆的組織如甲狀腺、肝臟、血塊、淋巴結、大塊癌組織等可適當厚一點(diǎn)，而脂肪組織、肺組織、纖維性腫瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應取薄一些；淋巴結應修掉兩側球冠，并盡量剔除周?chē)闹窘M織。在取材中還應十分注意組織內是否有縫線(xiàn)或骨組織，如碰到不可避免的鈣化組織，應與技術(shù)室講明，在切取纖維組織、肌肉組織、胃腸道時(shí)，應注意纖維及肌肉的走向，取材時(shí)盡可能按與纖維平行走向切取為佳。

       固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個(gè)制片過(guò)程中無(wú)法補救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細胞內的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結構和位 置的過(guò)程。固定的目的是為了防止組織細胞自溶與腐敗，防止了細胞內的酶對蛋白質(zhì)的分解作用，使細胞內的各和成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物或酶類(lèi)轉變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以 保持原有的結構與生活時(shí)相仿。另外，組織固定后，均呈一定的硬化狀態(tài)，增加組織韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。所以組織一旦離體必需及時(shí)固定，固定液的量 應為組織的5倍。固定的關(guān)鍵主要與固定的及時(shí)性、固定液的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時(shí)間有關(guān)。最常用的固定液為10%福爾馬林。筆者認為，10%福爾馬林由于受到福 爾馬林的質(zhì)量、使用時(shí)的揮發(fā)和取材時(shí)帶入的水分影響，濃度被降低致組織固定不足，而高濃度的福爾馬林，降低了對組織的穿透性，形成周?chē)潭ê枚醒牍潭ú坏降默F象。通 過(guò)實(shí)踐，本人認為以酸性12～15%的福爾馬林最佳。大標本（2cm厚）一般需要6～12個(gè)小時(shí)，小標本一般需要3～6個(gè)小時(shí)；當室溫低18℃時(shí)，可在37℃以下的溫箱內加溫4～6個(gè)小時(shí)。由于HE染色最佳著(zhù)色PH為3.5～4.5, 中性福爾馬林對蘇木素染色有一定影響,細胞核容易發(fā)灰,核染色質(zhì)不佳。所以, 盡管中性福爾馬林對抗原有很好的保存作用，但酸性福爾馬林對絕大多數抗原來(lái)說(shuō)也有很好的保存作用，所以在沒(méi)有特別處理的情況下常規HE用12～15%酸性福爾馬林也可 以（每100毫升12～15%福爾馬林液內加5毫升冰醋酸）。骨髓、結締組織固定以Bouin液為佳，經(jīng)Bouin液固定后的組織必須流水沖洗4小時(shí)以上。有條件的單位可根據不同要求選用二種或二種以上的固定液；少數單位還可建立組織冷凍庫，以便適應各種特殊的處理要求。

       所謂脫水就是利用脫水劑將組織內的水分置換出來(lái)，以利于有機溶劑的滲入，這一過(guò)程稱(chēng)為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明，而脫水過(guò)度（原因是組織 在純酒精內時(shí)間過(guò)久，發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化）容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫（溫度超過(guò)35℃）、脫水劑內加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過(guò)多等等。一般 我們總認為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系，其實(shí)低濃度的酒精具有強大的穿透力，比純酒精更容易滲透到組織塊內部使之脫水，組織如果在低濃度酒 精里充分脫水，在高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，因此，僅需短時(shí)間就可完成，如果這時(shí)不縮短純酒精的時(shí)間，便會(huì )引起組織發(fā)脆；如果脫水時(shí)加溫，使用丙酮，還可引起組織收縮，并影響免疫組織化學(xué)的標記。為了使石蠟浸入到組織塊內，必須經(jīng)過(guò)一種既能與脫水劑混合，又能與石蠟相溶的媒介物質(zhì)，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)透明。目前最好 的透明劑是二甲苯。很多人認為二甲苯極容易使組織發(fā)脆，這個(gè)觀(guān)點(diǎn)很片面，在常溫下，如果不是時(shí)間過(guò)長(cháng)（超過(guò)24小時(shí)以上）二甲苯并不會(huì )引起組織過(guò)份發(fā)脆，相反會(huì )使某些組 織結構比較質(zhì)韌的組織：比如子宮肌瘤等相當好切），但是當二甲苯溫度超過(guò)35℃以后，極易引起組織發(fā)脆。所以本人認為，大小標本最好分開(kāi)脫水，一般情況下，大標本脫水時(shí) 間（室溫18℃）以80%酒精2小時(shí)、95%酒精（2道）各1個(gè)半小時(shí)至2小時(shí)、純酒精（3道）各1個(gè)半小時(shí)至2小時(shí)，二甲苯（2道）各30-60分鐘為宜；小標本脫水時(shí)間應相應縮短。脫水時(shí)間長(cháng)短，與室溫高低有密切的相關(guān)。我們在實(shí)踐中發(fā)現，室溫在12～15℃時(shí)，可作為一個(gè)臨界溫度范圍。當室溫高于此溫度范圍時(shí)，組織容易脫水，可適當縮短脫水時(shí)間；而 室溫低于該溫度范圍時(shí)，應適當延長(cháng)脫水時(shí)間（如能保證在一個(gè)恒定的溫度下最佳）。更換試劑，應以量為基礎，定量更換，不能等到切片不好時(shí)再去更換。否則，至少會(huì )有2～3 批組織切片不好。根據我科經(jīng)驗，如試劑用量為500ml，每500個(gè)蠟塊更換一次為宜。

      組織透明后，在熔化的石蠟內浸漬的過(guò)程稱(chēng)為浸蠟。用其他浸透劑（如火棉膠、明膠等）滲入組織內部的過(guò)程可稱(chēng)為浸透或透入。浸蠟溫度過(guò)高（超過(guò)60℃），在蠟內加入二 甲苯蠟或由于透明時(shí)帶進(jìn)的二甲苯過(guò)多，都會(huì )導致組織發(fā)硬，還會(huì )使組織內的抗原受到破壞；所以作者主張浸蠟用的石蠟熔點(diǎn)在56℃（三道），第一道：石蠟30分鐘；第二道：石 蠟90分鐘；第三道：石蠟，90分鐘。浸蠟溫度控制在56～58℃左右。（第一道也可用硬脂酸石蠟1：3混合浸蠟，不僅可軟化組織，特別適用于比較韌、硬的組織，而且由于硬脂酸 是弱酸性的，對細胞核有媒染作用，核漿比鮮明，但容易脫片；同時(shí)對疏松組織容易散片）。有條件的可以每天打開(kāi)第一道石蠟的蓋子，讓二甲苯揮發(fā)。浸蠟所用的石蠟如有雜質(zhì) 盡可能過(guò)濾，以防附在組織上，造成切片刀刀口受損，或切片破碎和劃痕增多。

      用包埋劑來(lái)支持組織的過(guò)程，最常用的是石蠟包埋法，包埋的關(guān)鍵一是平整，二是方位。要求在包埋時(shí)，應采用鑷子輕壓組織塊拱起部份，使之平貼于底部，通常采用 組織的最大面包埋。囊壁、管腔組織應豎直包埋。小塊多顆組織，應盡量放在一起，并保證在一個(gè)平面上。修去兩邊的余蠟（所謂的兩邊，指切片時(shí)與切片刀垂直的兩側）。包埋 時(shí)還應注意有無(wú)縫線(xiàn)，紙絮，如有一定要去除。胃黏膜活檢標本，不能按一般的規律取最大包埋面，應采取窄面豎起包埋。包埋的蠟更應過(guò)濾，留有雜質(zhì)的石蠟，容易造成污染或 刀口受損。蠟的熔點(diǎn)應在56～58℃之間選擇，不提倡在冬天使用軟蠟。因為用軟蠟包埋的蠟塊，到了夏天，會(huì )粘在一起，不利于資料的保存，而且即使在冬天，用硬蠟包埋的蠟塊 也比用軟蠟包埋的蠟塊要好切。

      展片水溫應在42℃至47℃之間，這主要和包埋蠟的熔點(diǎn)有關(guān),水溫過(guò)高，會(huì )引起組織細胞散開(kāi)，水溫過(guò)低，切片皺摺無(wú)法攤平。包埋蠟中如有二甲苯，也會(huì )造成石蠟溶解現象。 而用一次性刀片切的片子，一碰到熱水，片子上的皺摺就無(wú)法再展開(kāi)，這有二個(gè)方法可以解決：第一、可以在切片時(shí)邊切邊向蠟片吹氣，這樣的片子就會(huì )非常平整，放到熱水里就 會(huì )自然展開(kāi)，比較方便快捷，但這樣的片子會(huì )略微厚一點(diǎn)；第二、在切完片子后，先把切片放在30%酒精水溶液中，讓酒精的張力自動(dòng)把皺摺展開(kāi)，然后再將切片移到熱水，這樣的 片子會(huì )較薄;如酒精濃度過(guò)高，容易引起切片破碎，出現裂隙，像脂肪之類(lèi)細胞間粘附性較小的組織一碰到酒精就會(huì )散開(kāi)，故不能用此法。最后撈片時(shí)玻片要干凈，要選擇那些完整 、無(wú)皺摺的切片，粘貼于玻片中1/3和下1/3的中間。

苯中脫蠟，或將二甲苯放入溫箱內預熱（37℃左右）脫蠟，最高不得超過(guò)60℃。然后經(jīng)高濃度的酒精到低濃度的酒精洗去二甲苯，至水。

      切片脫水應從低濃度的酒精到高濃度的酒精，80%酒精1道，95%酒精2道，純酒精2道，（正丁醇1道），二甲苯2道。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅退色，故脫水時(shí)間可短一點(diǎn)，每道3－5分鐘，純酒精每道10分鐘。為增加酒精與二甲苯的相融性，可在二甲苯前面增加一道正丁醇；石碳酸－二甲苯液也有此效，但用石碳酸時(shí)如 不洗凈，可引起切片退色，不利于切片久存，故不作推薦。切片經(jīng)二甲苯透明后，用中性樹(shù)膠封固。為增加切片的透明度，防止細胞收縮、龜裂或切片出現黑色結晶樣小點(diǎn)。所以 我們規定切片必須濕封，不得用溫箱烤干或電吹風(fēng)吹干后干燥封片。在南方冬春、霉雨季節，封片時(shí)要防止口鼻呼出的氣體接觸到切片；在天氣較潮濕的日子里，不宜一次將多張 切片取出待封，以免切片“還潮”，形成透明不佳,出現云霧狀水珠。脫水劑的更換也應有一定的時(shí)間規定。一般是每500ml液體，處理500張切片后更換一次為宜。封片樹(shù)膠不能過(guò) 稀，封片時(shí)樹(shù)膠要均勻充滿(mǎn)蓋玻片且樹(shù)膠不及外溢為佳。要將組織全部覆蓋，也不能有氣泡。最后，粘貼標簽，標簽必須貼于玻片左側，編號書(shū)寫(xiě)清楚，最好能打印。

      （本文轉載丁香通）