隨著(zhù)半干轉印系統不斷進(jìn)步，有越來(lái)越多的方法被應用于加速轉印過(guò)程。例如，用戶(hù)可以通過(guò)更換轉印緩沖液、使用不同的轉印裝置，或調整轉印條件、修改實(shí)驗設計，從而縮短實(shí)驗時(shí)間。這些方法對需要快速得到結果并做出正確判斷的用戶(hù)非常有用，比如從事臨床檢驗工作的用戶(hù)。使用傳統半干轉印方法過(guò)去通常需要40?60分鐘完成一次轉印，而現在通過(guò)使用快速緩沖液，Yrdimes?半干轉印系統可以在7分鐘之內完成蛋白質(zhì)高效快速轉印。Yrdimes?半干轉印系統可以通過(guò)較少的轉移緩沖液實(shí)現快速和有效的轉印，特別是在縮短篩選大量樣品所耗時(shí)間方面，Yrdimes?半干轉印系統可在40?60分鐘內同時(shí)運行最多12塊7×10cm的丙烯酰胺凝膠。此外，Yrdimes?半干轉印系統中配備鍍鉑鈦陽(yáng)極板和不銹鋼陰極板，可實(shí)現高度均勻電場(chǎng)，使轉印效果更均勻，機器使用壽命更長(cháng)。
 
      轉印緩沖液為兩電極間的化學(xué)環(huán)境提供電學(xué)連續性，從而在保持蛋白質(zhì)溶解度的同時(shí)，不對蛋白質(zhì)與固相轉印膜的結合產(chǎn)生阻礙。轉印緩沖液的成分會(huì )影響轉印時(shí)間，使用通常傳統實(shí)驗用緩沖液在Yrdimes半干轉印系統中，需要約40分鐘轉印樣品，現在，使用Pierce?快速半干轉印緩沖液，實(shí)驗證明通過(guò)Yrdimes半干轉印系統只需在7?10分鐘內即可完成快速轉印。

 
材料
 

      ? 膜：0.45μm孔徑的PVDF膜（PolyScreen?轉印膜，PerkinElmer?)
      ? Yrdimes?半干轉印系統（Wealtec）
      ? V-GES垂直電泳系統（Wealtec）
      ? ProMarker Plus（Wealtec）和293T細胞裂解液。
      ? 考馬斯亮藍染色： 0.5 g CCB/1000 ml MetOH: H2O: AOAC = 45:45:10.
      ? 脫色溶液：MetOH:H2O:AOAC = 45:45:10。
      ? PVDF膜脫色溶液：MetOH：AOAC = 90:10。
      ? Pierce?快速半干轉移緩沖液，10X。(Thermo Scientific)
      ? Elite200電源（Wealtec）
      ? Dolphin-Doc 和 Dolphin-Chemi 的凝膠成像分析系統（Wealtec）
      ? 抗鼠β-肌動(dòng)蛋白IgG抗體（Santa Cruz 生物科技公司）
      ? 山羊抗鼠IgG-HRP抗體（Santa Cruz 生物科技公司）
      ? 化學(xué)發(fā)光試劑（Western LightningTM）
 
方法

      ? 用Wealtec V-GES灌膠模具制備12％的SDS-PAGE
      ? 在SDS-PAGE膠中使用ProMarker Plus或293T細胞裂解液作為樣本，用Elite 200電泳儀供電進(jìn)行垂直電泳分離。濃縮膠80V/20分鐘，分離膠120V/80分鐘。
      ? 在此期間，用1:10比例的去離子水稀釋10× Pierce?快速半干轉移緩沖液，并在使用前攪拌均勻。
      ? 在稀釋過(guò)的Pierce?快速半干轉印緩沖液中平衡四張轉印紙（?1.25 mm）和兩張超厚濾紙（約2.5 mm）10?15分鐘，輕輕振蕩搖勻。
      ? 用甲醇預潤濕PVDF膜1分鐘，蒸餾水數分鐘，并在稀釋后的Pierce?快速半干轉印緩沖液中平衡10?15分鐘。
      ? 電泳完成后，在超純水中平衡SDS-PAGE10?15分鐘，輕輕振蕩搖勻。
      ? 將SDS-PAGE放入稀釋后的Pierce?快速半干轉印緩沖液中，輕輕混合振蕩10?15分鐘使平衡。
      ? 在Yrdimes轉印槽的陽(yáng)極板上將轉印膜與凝膠的夾層組裝起來(lái)，確保消除凝膠-膜各層之間的氣泡。

                                             
      ? 合上Yrdimes的上蓋向下按壓彈簧鎖，閉合上蓋。
      ? 用恒壓25 V轉印7?10分鐘。
      ? 在此之后，按照如下步驟染色：
      （a）考馬斯亮藍染色：
      （?。┦褂每捡R斯亮藍染色溶液給SDS-PAGE電泳和PVDF膜著(zhù)色30分鐘。
      （ii）分別采用各自去色溶液去除著(zhù)色
      （iii）使用Dolphin-DOC凝膠成像分析系統拍照保存。
      （b）化學(xué)發(fā)光反應：
      （?。┯?/span>TBST緩沖液洗滌PVDF膜10?30分鐘。
      （ⅱ）將PVDF轉到帶有抗小鼠β肌動(dòng)蛋白IgG抗體（1：1000）的TBST緩沖液1小時(shí)。
      （ⅲ）使用TBST緩沖劑對PVDF膜清洗10分鐘，重復三次。
      （ⅳ）使用山羊抗 - 小鼠IgG-HRP抗體將PVDF轉至TBST緩沖劑中按照（1：3000）的比例浸泡1小時(shí)。
      （ⅴ）使用TBST緩沖劑對PVDF膜清洗10分鐘，重復三次。
      （vi）使用ECL化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行染色。
      （vii）使用Dolphin-Chemi mini成像系統進(jìn)行拍攝。曝光1分鐘并進(jìn)行10次疊加。
 

 

      （本文轉載丁香園）