受體酪氨酸激酶(RTKs)在信號從細胞外轉導至細胞內的過(guò)程中發(fā)揮著(zhù)重要作用?,F已在人類(lèi)基因組上發(fā)現58種RTKs。RTKs與特定生長(cháng)因子、細胞因子或激素結合后被激活,導致自身的磷酸化。酪氨酸自身的磷酸化產(chǎn)生含有SH2信號蛋白傳遞的互補位點(diǎn),與含有不同SH2結構域信號蛋白的結合代表不同信號通路的激活。因此信號通路的激活可以通過(guò)檢測RTKs與SH2結構域的結合來(lái)評價(jià)。比較二個(gè)樣本的RTKs與SH2結構域的結合情況可以促進(jìn)發(fā)現信號通路的差異。Signosis提供的受體絡(luò )氨酸激酶(RTK)檢測試劑可一次實(shí)驗同時(shí)分析兩個(gè)樣本RTKS與46種不同SH2結構域的結合情況。
A.產(chǎn)品優(yōu)勢
多種復合——一次實(shí)驗可測定RTK與46種SH2結構域的相互作用;
差別定量——可以對各個(gè)蛋白與SH2結構域相互作用做差別定量分析;
操作簡(jiǎn)單——實(shí)驗步驟如同ELISA一樣簡(jiǎn)單。
B.技術(shù)原理
基于SH2結構域的RTK檢測試劑是一種類(lèi)似ELISA方法的檢測。46個(gè)孔包被了46種不同的SH2結構域,因此可檢測46種SH2的結合。待測樣本可同時(shí)與結構域和抗體結合。孵育后,洗滌去除未結合的抗體。加入HRP底物TMB,產(chǎn)生藍色反應,加入終止液后轉成黃色。450 nm處測定吸光值。
C.原理示意圖
D.結果展示
用基于SH2結構域的受體酪氨酸激酶(RTK)檢測試劑分別檢測經(jīng)過(guò)100ng/ml EGF處理的HeLa細胞裂解物和未經(jīng)過(guò)處理的HeLa細胞裂解物,并對檢測結果進(jìn)行比較。