醋酸纖維薄膜電泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纖維薄膜為支持物。它是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經(jīng)乙?；瞥?。它溶于丙酮等有機溶液中，即可涂布成均一細密的微孔薄膜，厚度以0.1 mm~0.15 mm 為宜。太厚吸水性差，分離效果不好；太薄則膜片缺少應有的機械強度則易碎。
  
     應用

    醋酸纖維薄膜電泳操作簡(jiǎn)單、快速、廉價(jià)。已經(jīng)廣泛用于血清蛋白，血紅蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋 白，甲胎蛋白，類(lèi)固醇激素及同工酶等的分離分析中，盡管它的分辨力比聚丙酰胺凝膠電泳低，但它具有簡(jiǎn)單，快速等優(yōu)點(diǎn)。
 
     特點(diǎn)

    1. 醋酸纖維薄膜對蛋白質(zhì)樣品吸附極少，無(wú)“拖尾”現象，染色后背景能完全脫色，各種蛋白質(zhì)染色帶分離清晰，因而提高了測定的精確性。

    2. 快速省時(shí)。由于醋酸纖維薄膜親水性較濾紙小，薄膜中所容納的緩沖液也較少，電滲作用小，電泳時(shí)大部分電流是由樣品傳導的，所以分離速度快，電泳時(shí)間短，一般電泳45~60 min 即可，加上染色，脫色，整個(gè)電泳完成僅需90 min 左右。
 
    3. 靈敏度高，樣品用量少。 血清蛋白僅需2μl血清，甚至加樣體積少至0.1 μl，僅含5 μg 蛋白樣品也可得到清晰的分離帶。臨床醫學(xué)檢驗利用這一點(diǎn)，檢測在病理情況下微量異常蛋白的改變。
 
    4. 應用面廣。某些蛋白在紙上電泳不易分離，如胎兒甲種球蛋白，溶菌酶，胰島素，組蛋白等用醋酸纖維薄膜電泳能較好地分離。

    5. 醋酸纖維薄膜電泳染色后，經(jīng)冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于掃描定量及長(cháng)期保存。

    6. 醋酸纖維薄膜電泳與聚丙烯酰胺凝膠電泳相比，操作簡(jiǎn)單，但分離效果不太好。如血清蛋白在醋酸纖維素薄膜電泳中，只能分離出5~6條區帶，而聚丙烯酰胺凝膠電泳可分離出數10條區帶。

     注意事項

    1. 醋酸纖維薄膜的預處理

    市售醋酸纖維薄膜均為干膜片，薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關(guān)鍵之一。將干膜片漂浮于電極緩沖液表面，其目的是選擇膜片厚薄及均勻度，如漂浮15 s~30 s 時(shí)，膜片吸水不均勻，則有白斑點(diǎn)或條紋，這提示膜片厚薄不勻，應舍去不用，以免造成電泳后區帶扭曲，界線(xiàn)不清，背景脫色困難，結果難以重復。由于醋酸纖維薄膜親水性比紙小，浸泡30 min 以上是保證膜片上有一定量的緩沖液，并使其恢復到原來(lái)多孔的網(wǎng)狀結構。最好是讓漂浮于緩沖液的薄膜吸滿(mǎn)緩沖液后自然下沉，這樣可將膜片上聚集的小氣泡趕著(zhù)走。點(diǎn)樣時(shí)，應將膜片表面多余的緩沖液用濾紙吸去，以免緩沖液太多引起樣品擴散。但也不能吸得太干，太干則樣品不易進(jìn)入薄膜的網(wǎng)孔內，而造成電泳起始點(diǎn)參差不齊，影響分離效果。吸水量以不干不濕為宜。為防止指紋感染，取膜時(shí)，應戴指套或用鑷子。
 

    2. 緩沖液的選擇

    醋酸纖維薄膜電泳常選用pH8.6巴比妥溶液，其濃度為0.05 mol/L~0.09 mol/L。選擇何種濃度與樣品及薄膜的薄厚有關(guān)。選擇時(shí)，先初步定下某一濃度，如電泳槽兩極之間的膜長(cháng)度為8 cm~10 cm，則需電壓25 V/cm膜長(cháng)，電流強度為0.4 mA/cm~0.5 mA/cm膜寬。當電泳達不到或超過(guò)這個(gè)值時(shí)，則應增加緩沖液濃度或進(jìn)行稀釋。緩沖液濃度過(guò)低，則區帶泳動(dòng)速度快，并由于擴散變寬；緩沖液濃度過(guò)高，則區帶泳動(dòng)速度慢，區帶分布過(guò)于集中不易分辨。
 

    3. 加樣量

    加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質(zhì)、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關(guān)。作為一般原則，檢測方法越靈敏，加樣量則越少，對分離更有利。如加樣量過(guò)大，則電泳后區帶分離不清楚，甚至互相干擾，染色也較費時(shí)。如電泳后用洗脫法定量時(shí)，每厘米加樣線(xiàn)上需加樣品0.1 μl~0.5 μl約相當于5 μg~1000 μg蛋白。血清蛋白常規電泳分離時(shí)，每厘米加樣線(xiàn)加樣量不超過(guò)1 μl，相當于60μg~80μg的蛋白質(zhì)。但糖蛋白和脂蛋白電泳時(shí)，加樣量則應多些。對每種樣品加樣量均應先作預實(shí)驗加以選擇。點(diǎn)樣好壞是獲得理想圖譜的重要環(huán)節之一，以印章法加樣時(shí)，動(dòng)作應輕、穩，用力不能太重，以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區帶分離效果。
 

    4. 電量的選擇

    電泳過(guò)程應選擇合適的電流強度，一般電流強度為0.4 mA/cm~0.5 mA/cm寬膜為宜。電流強度高，尤其在溫度較高的環(huán)境中，可引起蛋白質(zhì)變性或由于熱效應引起緩沖液中水分蒸發(fā)，使緩沖液濃度增加，造成膜片干涸。電流過(guò)低，則樣品泳動(dòng)速度慢且易擴散。
 

    5. 染色液的選擇

    對醋酸纖維薄膜電泳后染色應根據樣品的特點(diǎn)加以選擇。其原則是染料對被分離樣品有較強的著(zhù)色力，背景易脫色；應盡量采用水溶性染料，不宜選擇醇溶性染料，以免引起醋酸纖維素膜溶解。應控制染色時(shí)間。時(shí)間長(cháng)，薄膜底色深不易脫去；時(shí)間短，著(zhù)色淺不宜區分，或造成條帶染色不均，必要時(shí)可進(jìn)行復染。
 

    6. 透明及保存

    透明液應臨用前配制，以免冰乙酸及乙醇揮發(fā)影響透明效果。這些試劑最好選用分析純。透明前，薄膜應完全干燥。透明時(shí)間應掌握好，如在透明乙液中浸泡時(shí)間太長(cháng)則薄膜溶解，太短則透明度不佳。透明后的薄膜完全干燥后才浸入石蠟中，使薄膜軟化。如有水，則液體石蠟不易浸入，薄膜不易平展。