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脂肪氧化酶活性測定

     植物材料,從葉片中提取粗蛋白,0.5g葉片使用液氮研磨,加入到4ml冰預冷提取緩沖液(0.05mol/L PH6.4 磷酸鈉緩沖液,1mmol/L EDTA,1%PVP,1mmol/LDTT)中,12,000g,4℃離心10min,取上清進(jìn)行脂肪氧化酶酶活性分析。

 

     通過(guò)檢測234nm光吸收(Beckman DU800, Beckman)來(lái)測定脂肪氧化酶活性,底物溶液配制:280mg亞油酸,280mgTween-20加入到8mL雙蒸水中,上下顛倒混勻,加入1mL 1mol/L NaOH使溶液澄清加雙蒸水定容到50mL,-70℃保存備用(Huang, et al. 2005)。2mL反應體系包括:1.93mL 0.1mol/L pH6.4 磷酸鈉緩沖液,50μL底物溶液,20μL酶粗提液,同時(shí)設立不加酶的空白對照,25℃反應3min,記錄234nm光吸收變化。

 

 

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