一、研究背景

 

      在腦科學(xué)基礎研究領(lǐng)域中，腦內給藥已經(jīng)成為大多數動(dòng)物實(shí)驗的重要環(huán)節，比如注射病毒、細胞、蛋白分子、藥物、標記染料探針等，根據實(shí)驗設計，常見(jiàn)有兩種給藥方式：?jiǎn)未巫⑸浣o藥和多次反復給藥（慢性給藥），前者通常采用微量注射器（如下圖，左），后者采用套管（如下圖，右）來(lái)實(shí)現。無(wú)論哪一種方式，均具有操作簡(jiǎn)單、動(dòng)物微創(chuàng )（或無(wú)創(chuàng )）、注射精準等優(yōu)點(diǎn)。

二、套管微量給藥系統

      本文主要介紹多次反復給藥方式—套管。

      功能用途：用于小鼠、大鼠、猴等實(shí)驗動(dòng)物目標腦區的反復多次給藥，也可以結合配套光纖使用（光遺傳），在給藥的同時(shí)或者給藥后繼續對目標腦區進(jìn)行光刺激。

      應用范圍：人類(lèi)神經(jīng)性疾病動(dòng)物模型、高級腦功能、情感、認知等相關(guān)研究。

三、套管系統配套（單管）

       套管系統組配套（雙管）

四、動(dòng)物實(shí)驗（材料準備）

      1. 儀器設備與配件：

      異氟烷氣體麻醉系統（包括定位儀專(zhuān)用麻醉面罩和氣體回收系統）、腦立體定位儀、顯微鏡、冷光源、保溫裝置（電子或水浴保溫）、顱骨水平校準器、顱鉆（包括鉆頭）、顱鉆夾持器、套管、套管夾持器、PE
管、小螺釘、微量注射泵、微量注射器、手術(shù)器械包、大小鼠剃毛器、凝血器、手術(shù)墊、快速滅菌器2.
試劑

      碘伏、酒精、酒精棉球、干棉球、生理鹽水、牙科水泥（牙托水和牙托粉）、抗生素、異氟烷、【注射藥物】

五、實(shí)驗操作步驟（說(shuō)明）

      第 1 步：根據腦圖譜或文獻確定目標腦區的三維坐標：AP 值（Y 軸）、ML 值（X 軸）和 DV 值（Y 軸）；

 

      第 2 步：將動(dòng)物麻醉，頭部固定到腦立體定位儀上，定位好目標腦區的 X/Y 水平坐標，顱鉆或牙科鉆鉆孔（同時(shí)在孔位附近鉆 2-3
個(gè)小孔，用于固定螺絲），然后用針輕微刺破硬腦膜；

 

      第 3 步：將螺絲固定到孔內，然后將準備好的導管緩慢植入顱內，再用牙科水泥將螺絲和導管固定起來(lái)；

 

      第 4 步：等待牙科水泥凝固后（約 15 分鐘左右），緩慢插入導管帽，鎖緊；根據實(shí)際情況判斷是否需要縫合皮膚；

 

      第 5 步：動(dòng)物恢復期，約 2-3 天即可恢復。在此期間，注意動(dòng)物感染，及時(shí)預防；

 

      第 6 步：將注射內管、PE 管、鎖緊螺帽、注射器提前組裝好，接著(zhù)取出導管帽，將注射內管緩慢插入導管，鎖緊；

 

      第 7 步：設置好注射量、注射速度，開(kāi)始注射。注射完畢后，靜止約 10 分鐘，待藥物被充分吸收，然后緩慢拔出注射內管，繼續插入導管帽，鎖緊。

 

六、注意事項

 

      1. 除金屬導管帽外，非金屬導管帽、導管、注射內管、導管帽芯、鎖緊螺帽和 PE 管均可以采用高壓蒸汽、紫外、環(huán)氧乙烷等方式進(jìn)行消毒滅菌；

 

      2. 使用 PE 管前，可以用大頭針將 PE 管的一端接頭撐大一點(diǎn)或者用酒精泡一小會(huì )，便于插入注射內管。插入注射內管時(shí)，務(wù)必注意的是，PE 管必須套在白色層外層（非金屬管外層），否則易脫落、松動(dòng)，導致漏液，如下圖紅色箭頭所示；

 

      3. 因 PE 管、注射內管內部存在死體積，因此在將注射內管、PE 管、鎖緊螺帽、注射器組裝好以后，插入導管前，應將注射液（比如藥物）將 PE 管和注射內管充滿(mǎn)，保證注射的準確。操作方法：向前推注射器，直至注射內管前端有液體冒出。  

 

    (本文轉載丁香通）