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DNA定量測定-Feulgen反應

 

實(shí)驗背景與原理: 

       DNA是主要的遺傳物質(zhì),集中于染色體上。在真核細胞中DNA主要存在于細胞核中,在線(xiàn)粒體和葉綠體中也有少量分布。DNA的基本組成單位是脫氧核糖核酸,它由脫氧核糖、堿基和磷酸組成,通過(guò)與一些化學(xué)物質(zhì)相互作用可產(chǎn)生有色反應,最終顯示DNA在細胞中的存在部位及分布情況。 

 

  Feulgen染色是經(jīng)典的顯示脫氧核糖核酸的的方法。其基本反應原理是標本經(jīng)稀鹽酸水解后,DNA分子中的嘌呤堿基被解離,從而在核糖的一端出現醛基。Schiff試劑中的無(wú)色品紅可與醛基反應,形成含醌基的化合物分子,因醌基為發(fā)色團,故可呈現出紫紅色,即DNA經(jīng)稀酸水解后產(chǎn)生的醛基,具有還原作用,可與無(wú)色品紅結合形成紫紅色化合物,從而顯示出DNA的分布。 

 

  DNA水解后的脫氧核糖的C-1位置釋放的醛基可與席夫試劑反應顯紫紅色。細胞中只有DNA才具有這種專(zhuān)一的Feulgen反應,因此利用此反應可以鑒定DNA的存在。另外由于此反應對含有DNA的核結構顯示細致、清晰、染色穩定,因此被廣泛用于核及染色體的研究中 


實(shí)驗步驟 

  1.切片經(jīng)脫蠟入水。 

  2.1mol/L HCl 浸洗。 

  3.切片放入60℃預熱的1mol/L HCl 8min。 

  4.室溫下1mol/L HCl 浸洗。 

  5.餾水浸洗2次,每次5min. 

  6.加入席夫液,于室溫反應30-60min。 

  7.亞硫酸鈉液中漂洗3次,每次2min。 

  8.蒸餾水浸洗兩次,每次5min。 

  9.脫蠟,透明,封片。 

  10.鏡檢 

 

注意事項 

  1.水解時(shí)間要適宜,一般8-15min. 

  2.漂洗時(shí),所用的亞硫酸鈉水溶液現配現用。 

  3.為減少假陽(yáng)性和非特異性染色必須做對照試驗。僅需地3步,即60℃ 1mol/L HCl 水解改為室溫15min, 其余相同,結果DNA應為Feulgen 陰性對照。 

 

(本文轉載丁香園) 

 

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