轉錄因子作為一種調控基因表達的關(guān)鍵蛋白，在很多研究中都是需要重點(diǎn)監測的對象。特別是對具有活性的轉錄因子的檢測，有著(zhù)重要的意義。 

轉錄因子的一個(gè)重要特點(diǎn)是在經(jīng)過(guò)翻譯后修飾及其它一些變化以后才具有發(fā)揮功能的活性。傳統的測方法，如ELISA、Western Blot、熒光定量PCR等，都不能區分活化與未活化的轉錄因子，限制了這些方法在轉錄因子檢測方面的應用。目前比較常用的是基于轉錄因子與特定DNA序列結合原理的凝膠遷移實(shí)驗（EMSA），可以對樣本中具有活性的轉錄因子進(jìn)行定性檢測。同時(shí)，凝膠遷移實(shí)驗需要制膠、跑膠、轉膜、檢測等步驟，操作稍顯繁瑣；特別是在樣本量較大的時(shí)候，更顯得力不從心。

為了解決這些轉錄因子檢測中的問(wèn)題，美國Signosis開(kāi)發(fā)出了一種快速高效的半定量活性轉錄因子檢測方法——濾板法。這種方法同樣基于轉錄因子與特定DNA序列結合的原理，以標準96孔板為載體進(jìn)行實(shí)驗操作。針對不同的轉錄因子設計特異性的生物素標記DNA探針，探針與樣本核提取物中相應的轉錄因子結合形成TF/DNA復合物。用濾板除去游離的DNA探針，隨后從濾板上洗脫并收集TF/DNA復合物中的DNA探針。用標準96孔板對捕獲收集到的DNA探針，通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素檢測，在化學(xué)發(fā)光儀上讀取發(fā)光度值（RLUs）。

    這種方法主要有三大優(yōu)勢：

        1、操作簡(jiǎn)單。整個(gè)實(shí)驗操作過(guò)程類(lèi)似于ELISA實(shí)驗，操作簡(jiǎn)單，無(wú)需特殊設備。  

        2、高效，性?xún)r(jià)比高。一塊標準96孔板上可以同時(shí)進(jìn)行96個(gè)樣本中的一種轉錄因子檢測，通過(guò)對探針的組合使用，還可以選擇檢測48個(gè)樣本中的兩種轉錄因子、32個(gè)樣本中的三種轉錄因子或者24個(gè)樣本中的四種轉錄因子。  

        3、結果數值化呈現，判斷更加客觀(guān)，同時(shí)方便進(jìn)行樣本之間的比較及半定量分析。

    （本文轉載丁香園）