Western Blot 即免疫印跡試驗，可以利用 Western Blot 來(lái)比較在不同條件下，不同細胞組織中目的蛋白表達量的差異，屬于定性，半定量試驗。既然有差異性比較，參照物必不可少。Western Blot 試驗中的標準（表達量）參照物即內參，有了參照物才能準確地比較目的蛋白表達量的差異。內參一般選用管家基因表達的蛋白，它們在各個(gè)組織細胞中表達相對恒定，不會(huì )因為外部條件變化而引起表達量的變化。而且內參可以監測整個(gè)試驗體系是否正常，比如蛋白提取過(guò)程，轉膜體系，顯色體系等。

      beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 等已作為成熟的內參運用到試驗中，下面就大致介紹下如何選擇內參：

樣本來(lái)源

      ● 如果是哺乳動(dòng)物的組織或細胞，主要以 beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 為代表；

      ● 如果是植物樣本，主要以 actin、Rubisco 為代表。

目的蛋白定位

      ● 全細胞蛋白和細胞質(zhì)：beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 等；

      ● 細胞核蛋白: PCNA 等；

      ● 核膜蛋白：Lamin B1 等；

      ● 胞膜蛋白：Na(+)/K(+) ATPase 等。

目的蛋白分子量

      beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 的分子量分別是 42kd，50kd，37kd，目的蛋白分子量最好能與內參蛋白分子量相差 5kd 以上，才能分開(kāi)目的蛋白和內參，寫(xiě)文章做圖也更美觀(guān)；

三大內參

      beta Actin，肌動(dòng)蛋白，細胞骨架蛋白。它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。beta Actin 作為內參是得到公認的，針對大多數組織和細胞來(lái)說(shuō)的，它廣泛分布于細胞質(zhì)內，表達量非常豐富。但是在一些少量特殊的情況下比如脂肪組織和細胞內，beta Actin 的表達量就很少。

      GAPDH，甘油醛-3-磷酸脫氫酶，該酶是糖酵解反應中的一個(gè)酶，幾乎在所有組織細胞中都高水平表達，在同種細胞或組織中的表達量一般是恒定的，且很少受外部誘導物的影響。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下，會(huì )增加
GAPDH 在特定細胞和組織中的表達。

      beta Tubulin，微管蛋白，細胞骨架蛋白。作為內參抗體，beta Tubulin 表達通常不會(huì )發(fā)生改變，因此被廣泛用于 Western Blot 內參，也常被用于免疫染色觀(guān)察細胞的微管結構。

  （本文轉載丁香園）