免疫印跡(常稱(chēng)之為Western印跡),可用于檢測單克隆或多克隆抗體識別的抗原。
實(shí)驗材料
蛋白質(zhì)
試劑、試劑盒
轉緩沖液
儀器、耗材
搖床 海綿纖維素膜 尼龍膜 電轉儀
5. 準備轉印膜,按凝膠大小但各邊都比凝膠大約1 mm 剪膜。成45。地慢慢將凝膠放入蒸餾水中,水將會(huì )滲進(jìn)膜中并潤濕整個(gè)表面。然后在轉移緩沖液中平衡10~15 min,PVDF膜短暫地在100%甲醇中放一下,然后在轉移緩沖液中平衡10~15 min。
6. 用轉移緩沖液濕潤凝膠表面,直接將已潤濕的膜放在凝膠頂部,排去氣泡。
7. 潤濕另一張Whatman 3MM 濾紙,并置于膜的陽(yáng)極面,排去所有氣泡,在濾紙的頂部放另一塊Scotch-Brite墊或海綿。
8. 將轉移盒頂部的半面放置適當,扣緊,完成組裝。
9. 往轉移槽中加入轉移緩沖液,按正確的極性方向將轉移盒放進(jìn)電轉儀中,連接電源。
10. 在冷卻條件下100 V 電轉30~60 min,或在冷室中14 V 電轉過(guò)夜,
11. 關(guān)電源,拆卸轉印裝置,取出轉印膜,并在膜上剪一小角或用軟性鉛筆或Paper-Mate筆作上標記定位。
12. 凝膠用考馬斯亮藍染色以確定轉移效率。需要時(shí),也可將硝酸纖維素膜或PVDF膜以輔助方案提供的可逆染色方法使蛋白質(zhì)顯跡,也可用如考馬斯亮藍、印度墨墨汁、萘酚藍或膠體金不可逆染色。
13. 進(jìn)行蛋白質(zhì)的免疫雜交和顯跡。
(本文轉載丁香園)