免疫血清的制備是一項常用的免疫學(xué)實(shí)驗技術(shù)。高效價(jià)、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑（如用于制備免疫標記抗體等），也可供特異性免疫治療用。

實(shí)驗方法原理
       具有免疫原性的抗原可刺激機體相應B細胞增殖、分化形成漿細胞并分泌特異性抗體。由于抗原分子表面的不同決定簇為不同特異性的B細胞克隆所識別，因此由某一抗原刺激機體后產(chǎn)生的抗體，實(shí)際上為針對該抗原分子表面不同決定簇的抗體混合物（即多克隆抗體）。另外，抗體的產(chǎn)生具有回憶應答的規律性，現為初次免疫注射與再次免疫注射后的抗體應答特點(diǎn)截然不同。這是由于記憶性B細胞參與再次應答所致。

實(shí)驗材料       

       家兔 

       試劑、試劑盒
       滅菌生理鹽水   IgG   酒精   碘酒   羊毛脂   石蠟油   BCG   FIA   FCA-IgG
       儀器、耗材:刀   鑷子   注射器   針頭   稱(chēng)量瓶   量筒   動(dòng)物固定架   三角燒瓶   手術(shù)器械   血管夾   黑絲線(xiàn)   放血管
         
實(shí)驗步驟
一、免疫方法 
      據抗原的性質(zhì)不同而異。下面以制備家兔抗人IgG免疫血清為例作具體說(shuō)明。
      1.  用剪刀剪去家兔兩后腳掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮膚。

      2.  第一次免疫 用2 ml注射器吸取弗氏完全佐劑（FCA）乳化的抗原（人IgG）下稱(chēng)FCA IgG液1 ml，每側腳掌皮下各注入0.5 ml。  

      4.  間隔7-10 天后，從耳靜脈采血0.5～1.0 ml，分離血清，以雙相瓊脂擴散試驗測定免疫血清的抗體效價(jià)（即試血）。效價(jià)至少應達到1∶16以上時(shí)才能放血。  

      5.  若效價(jià)未達到要求，可用不加佐劑的抗原液（人IgG）耳靜脈內注射免疫。即于1 周內注射3 次，分別為0.1、0.3、0.5 ml。間隔1 周再試血。如效價(jià)達到要求應立即放血。另外，也可在第2 次免疫后，以弗氏不完全佐劑        （FIA）乳化的抗原（人IgG）（簡(jiǎn)稱(chēng)FIA-IgG）再免疫1-2 次。注射部位、劑量和間隔均同第2 次，再試血測抗體效價(jià)，如效價(jià)達到要求立即放血。

二、放血 
      1.  心臟采用血法
    （1）家兔仰面，四肢縛于動(dòng)物固定架上（或由助手抓住四肢固定）。
   （2）剪去左胸部兔毛，消毒皮膚。
   （3）用左姆指摸到胸骨劍突處，食指及中指放在右胸處輕輕向左推心臟，并使心臟固定于左胸側位置。然后，以左拇指觸摸心臟搏動(dòng)最強的部位。
   （4）用50 ml注射器（連接16號針頭），傾針45°角度，對準心搏最強處刺入心臟抽血致死。
   （5）將抽取的血液立即注入無(wú)菌三角燒瓶中，待凝固后分離血清。
     

     2.   頸動(dòng)脈放血法
          （1）家兔仰臥同上固定。頭部略放低以暴露頸部。剃毛及消毒皮膚。
   （2）沿頸部中線(xiàn)切開(kāi)皮膚約10 cm，分離皮下組織，直至暴露出氣管兩側的胸鎖乳突肌。
   （3）分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區疏松組織，暴露出頸總動(dòng)脈后使之游離。
   （4）于動(dòng)脈下套入兩根黑絲線(xiàn)，分別置于遠心及近心端。結扎遠心端的絲線(xiàn)。近心端的動(dòng)脈用血管夾夾住。
   （5）用尖頭小剪刀在兩根絲線(xiàn)間的動(dòng)脈璧上剪一小口，插入塑料放血管。再將近心端的絲線(xiàn)結扎固定于放血管上，以防放血管滑脫。
   （6）松開(kāi)血管夾，使血液流入滅菌三角燒瓶中。一般一只家兔可放血80～100 ml。

三、分離血清   
        將三角燒瓶的血置37 ℃溫箱1 小時(shí)，再置4 ℃冰箱內3～4 小時(shí)。待血液凝固血塊收縮后，用毛細滴管吸取血清。于3000 rpm離心15 分鐘，取上清加入防腐劑（0.01 ％硫柳汞或0.02 ％疊氮鈉，最終濃度），分裝后置4 ℃冰箱中保存備用。 （本文轉載丁香園）