(一)實(shí)驗目的:用放線(xiàn)菌的玻璃紙培養物觀(guān)察放線(xiàn)菌的個(gè)體形態(tài)。
(二)實(shí)驗原理:
放線(xiàn)菌自然生長(cháng)的個(gè)體形態(tài)的觀(guān)察現多用玻璃紙瓊脂透析培養法。
玻璃紙具有半透膜特性,其透光性與載玻片基本相同,采用玻璃紙瓊脂平板透析培養,能使放線(xiàn)菌生長(cháng)在玻璃紙上,然后將長(cháng)菌的玻璃紙剪取小片,貼放在載玻片上,用顯微鏡鏡檢可見(jiàn)到放線(xiàn)菌自然生長(cháng)的個(gè)體形態(tài)。
(三)實(shí)驗器材:
1、活材料:培養5-7天的紫色直絲鏈霉菌(Streptomyces violaceorectus)的斜面菌種、吸水鏈霉菌5102(Streptomyces hygroscopicus var.Yingchengensis(5102))斜面菌種。
2、培養基:高氏一號瓊脂培養基(見(jiàn)附錄一、10)
器材:無(wú)菌平皿、玻璃紙、 9ml無(wú)菌水若干支、酒精燈、火柴、接種環(huán)、鑷子、玻璃刮鏟、1ml無(wú)菌吸管、剪刀、載玻片、顯微鏡。
(四)實(shí)驗方法:
(1)將玻璃紙剪成培養皿大小,用舊報紙隔層疊好后滅菌。
(2)將放線(xiàn)菌斜面菌種制成10-3的孢子懸液。
(3)將高氏一號瓊脂培養基熔化后在火焰旁倒入無(wú)菌培養皿內,每皿倒15ml左右,待培養基凝固后,在無(wú)菌操作下用鑷子將無(wú)菌玻璃紙履蓋在瓊脂平板上即制成玻璃紙瓊脂平板培養基。
(4)分別用1ml無(wú)菌吸管取0.2ml吸水鏈霉菌(5102)孢子懸液,紫色直絲鏈霉菌孢子懸液分別滴加在兩個(gè)玻璃紙瓊脂平板培養基上,并用無(wú)菌玻璃刮鏟涂抹均勻。
(5)將接種的玻璃紙瓊脂平板置28-30℃下培養。
(6)在培養至3天,5天,7天時(shí),從溫室中取出平皿。在無(wú)菌環(huán)境下。打開(kāi)培養皿,用無(wú)菌鑷子將玻璃紙與培養基分離,用無(wú)菌剪刀取小片置于載玻片上用顯微鏡觀(guān)察。