厭氧菌在有氧的情況下不能生長(cháng)。要培養厭氧菌,必須創(chuàng )造一個(gè)無(wú)氧的環(huán)境。通常用培養基中加入還原劑,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。如皰肉培養基、硫基乙酸鈉培養基,牛心腦浸液培養基等。常用的厭氧培養方法有許多,可根據實(shí)際情況選用。
厭氧缸法
接種好標本的平板或液體培養基試管,可放入厭氧缸內培養,厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學(xué)的方法使缸內造成厭氧環(huán)境,從而將厭氧菌培養出來(lái)。
厭氧袋法(bio-bag)
即在塑料袋內造成厭氧環(huán)境來(lái)培養厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內裝氣體發(fā)生管(有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內在半小時(shí)內造成無(wú)氣環(huán)境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態(tài),可以孵育。
厭氧手套箱法(anaerobie glove box)
一個(gè)密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個(gè)有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個(gè)手套,可通過(guò)手套在箱內進(jìn)行操作,故名。箱側有一交換室,具有內外二門(mén),內門(mén)通箱內先關(guān)著(zhù)。欲放物入箱,先打開(kāi)外門(mén),放入交換室,關(guān)上外門(mén)進(jìn)行抽氣和換氣(h2,co2,n2)達到厭氧狀態(tài),然后手伸入手套把交換室內門(mén)打開(kāi),將物品移入箱內,關(guān)上內門(mén)。箱內保持厭氧狀態(tài),也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢(qián)殘余氧化合成水的原理。該箱可調節溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便于觀(guān)察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養研究,大量培養基可放入作預還原和厭氧性無(wú)菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動(dòng)調節。