結核桿菌培養基配制的方法：

     結核桿菌培養采用羅－琴培養基，為防止培養基干裂，可加入適量甘油，我們是在1600ml的培養基中加入甘油12ml。

      羅－琴培養基成分：

     磷酸二氫鉀2.4g；一水硫酸鎂0.24g；拘掾酸鎂0.6g；天門(mén)冬素3.6g；2％孔雀綠水溶液20ml；蒸餾水600ml；馬鈴薯淀粉30g；甘油12ml；新鮮雞蛋液1000ml。

      具體配制方法如下：

     1、加熱上述重量的溶解磷酸鹽，硫酸鎂，拘掾酸鎂，天門(mén)冬素和甘油于600ml蒸餾水中。

     2、一邊攪拌一邊加入馬鈴薯淀粉，于沸水中水溶1小時(shí)，在置于56度水浴箱內1小時(shí)。

     3、將新鮮雞蛋洗凈后，在75％乙醇中消毒30分鐘，去除后點(diǎn)火燒掉雞蛋外殼上的乙醇，無(wú)菌打破蛋殼，將蛋白和蛋黃收集于滅菌容器內，充分攪拌，無(wú)菌紗布過(guò)濾，在收集新鮮雞蛋液1000ml；加入上述混合液中。

     4、加入滅菌的2％孔雀綠水溶液，均勻混合，分裝于滅菌的試管內，加塞封閉，斜置于血清凝固器內，85度1小時(shí)間歇滅菌2次。于冰箱保存備用。

      結合桿菌的計數

      計數方案：

     結核菌生長(cháng)緩慢且難于培養，不適于用平板培養，一是易污染環(huán)境，二是培養時(shí)間長(cháng)了，平板會(huì )很快干掉。因此結核菌的cfu測定不能象大腸菌那樣采用平板菌落計數法。一般很少有人做結核菌的cfu計數，如果一定要做，可用Middlebrook7H9液體培養基依次稀釋?zhuān)俳臃N于羅氏斜面培養基或Middlebrook7H10，計數可見(jiàn)到單菌落的培養斜面上的菌落數，計算出cfu。

     一般斜面面積可達4~5平方厘米，只要稀釋菌液中的活菌數足夠少，就肯定可得到可目測出的單菌落數（n）。假設每個(gè)稀釋度菌液的體積為v1，接種體積為V2，則cfu/ml=n×V1×稀釋倍數/V2.

     培養出的結核菌菌落，可用一玻璃試管，加幾顆玻璃珠，1ml生理鹽水，一起高壓蒸汽滅菌。然后，挑取菌落到此試管中，振搖以獲得均勻菌懸液，再稀釋成所需麥氏濁度。還可將已分純的細菌接種到7H9肉湯培養基培養，待菌生長(cháng)后再根據你的需要稀釋成一定麥氏濁度的菌液。因Middlebrook 7H9 brooth添加了OADC及吐溫-80，不但營(yíng)養豐富，而且細菌可呈均勻生長(cháng)。

      結合綜述結果：

     結核菌與一般細菌不一樣，容易形成菌團，接種前應研磨均勻，制備1mg/ml菌懸液后用10倍稀釋?zhuān)绻麤](méi)經(jīng)驗，多接幾個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度最少3支，每支接種0.1ml，計算最后長(cháng)滿(mǎn)的不計算,可計數稀釋度菌落就可以，一般合格培養基培養每毫克結核桿菌約1-2千萬(wàn)活菌。

     如果第1次做，可以拿卡介苗(0.5mg/支)當對照（2-10百萬(wàn)cfu/mg），以確定你實(shí)驗方法無(wú)誤。