一、材料和試劑

     1.  6 cm 細胞培養皿（Fiosher）。

     2.  人類(lèi)或小鼠細胞系，細胞試驗所需要的生長(cháng)培養基。

     3.  凝聚胺。

     4.  合適的選擇性抗生素。

     二、儀器

     1.  細胞培養箱

     三、步驟

     1.  慢病毒感染方法應該根據不同的細胞系和以細胞為基礎的試驗來(lái)進(jìn)行優(yōu)化。例如，下列的參數應該在大規模的感染之前進(jìn)行優(yōu)化，以確定一個(gè)實(shí)驗的最適條件：

    （1）細胞種植密度

    （2）慢病毒的數量

    （3）嘌呤霉素的濃度

    （4）感染時(shí)間

     2.  在6 cm 培養皿中種植適當密度的細胞，每孔體積6 ml。

    （1）貼壁細胞：轉染前1天種植細胞

    （2）懸浮細胞：轉染當天種植細胞，培養基中需要含有凝聚胺。

     3.  細胞中加入病毒：

    （1）（貼壁細胞）：棄掉培養基，加入新鮮的含有凝聚胺的培養基?；蛘?，棄掉部分培養基并且補充含有凝聚胺的培養基。調整體積和凝聚胺的濃度，使得凝聚胺的終濃度為8 ug/ml。

     4.  病毒感染：

    （1）孵育細胞過(guò)夜。

    （2）感染后24 h 更換培養基。棄掉培養基，換入6 ml 新鮮的培養基。如果需要抗生素選擇，則使用含有抗生素的新鮮培養基。

     注意：嘌呤霉素的濃度應該根據每種細胞系來(lái)進(jìn)行優(yōu)化；常用的濃度范圍為：2-5 μg/mL。5.  孵育細胞，根據需要每隔幾天更換培養基（如果需要，則要含有抗生素）。孵育時(shí)間的長(cháng)短主要依賴(lài)于感染后的試驗。