1、細菌保存于穿刺培養物中：一般細菌保存于穿刺培養物可以維持兩年。具體方法如下：用滅菌接種針挑取分散良好的單菌落，針緩慢穿過(guò)瓊脂到達瓶底，連續幾次，蓋上瓶蓋擰緊，做好標記。室溫下存放于暗處。（最好一點(diǎn)可以將瓶蓋放松，在適當溫度下培養過(guò)夜，再擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜，室溫或最好在4度避光保存）。

     2、細菌保存于含有甘油的培養物中：

    （1）在液體培養基中生長(cháng)的細菌培養物：取0.85ml細菌培養物，加入0.15ml高壓滅菌甘油，振蕩培養物使甘油分布均勻，然后轉移到標記好的保存管內，密封，在乙醇－干冰或液氮中凍結后再轉至－70度長(cháng)期保存。在復蘇時(shí)，用滅菌接種針刮取凍結的培養物表面，然后立即把黏附于接種針上的細菌劃于含適當抗生素的LB瓊脂平板表面，于37度過(guò)夜。

    （2）在瓊脂平板上生長(cháng)的細菌培養物：從瓊脂平板表面刮下細菌放入裝有2mlLB的無(wú)菌試管內，再加入等量的含有30％滅菌甘油的LB培養基，振蕩使甘油完全分布均勻后，分裝于無(wú)菌保存管內，密封，再按前述方法冰凍保存。這一方法的優(yōu)點(diǎn)在于可用于保存在質(zhì)粒載體上建立的cDNA文庫。

     溫馨提醒：

     如果甘油與培養基混合后凍存在一般冰箱的冰凍室里，不能反復復蘇使用，而且如果甘油含量太低，凍結成冰塊，復蘇效果不佳。一般都使用甘油終濃度為30%。（編者認為，20%足以）