（一）實(shí)驗目的：學(xué)習細菌的鞭毛染色法

    （二）實(shí)驗原理：細菌的鞭毛極細，直徑一般為10-20nm,只有用電子顯微鏡才能觀(guān)察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成?，F推薦以下兩種染色法。

    （三）實(shí)驗器材

     1. 活材料：培養12-16h的水稻黃單胞菌（Xanthomonas oryzae），粘質(zhì)賽氏桿菌（Serratia marcescens）或假單細胞菌（Pseudomonas sp.）斜面菌種。

     2. 染色液和試劑：硝酸銀染色液（見(jiàn)附二、（一）、8）、Leifson染色液（見(jiàn)附二、（一-）、9）、香柏油、二甲苯。

     3. 器材：載玻片、擦鏡紙、吸水紙、記號筆、玻片擱架、鑷子、接種環(huán)，顯微鏡。

    （四）實(shí)驗方法

     1. 鍍銀法染色

    （1）清洗玻片  選擇光滑無(wú)裂痕的玻片，最好選用新的。為了避免玻片相互重疊，應將玻片插在專(zhuān)用金屬架上，然后將玻片置洗衣粉過(guò)濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過(guò)濾，以除去粗顆粒），煮沸20min.取出稍冷后用自來(lái)水沖洗、晾干，再放入濃洗液中浸泡5-6天，使用前取出玻片，用自來(lái)水沖去殘酸，再用蒸餾水洗。將水瀝干后，放入95%乙醇中脫水。

    （2）菌液的制備及制片：菌齡較老的細菌容易失落鞭毛，所以在染色前應將待染細菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養基斜面上（培養基表面濕潤，斜面基部含有冷凝水）連續移接3-5代，以增強細菌的運動(dòng)力。最后一代菌種放恒溫箱中培養12-16h.然后，用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數環(huán)，移至盛有1-2mL無(wú)菌水的試管中，使菌液呈輕度混濁。將該試管放在37℃恒溫箱中靜置10min（放置時(shí)間不宜太長(cháng)，否則鞭毛會(huì )脫落），讓幼齡菌的鞭毛松展開(kāi)。然后，吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端，用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。

     用于鞭毛染色的菌體也可用半固體培養基培養。方法是將0.3-0.4%的瓊脂肉膏培養基熔化后倒入無(wú)菌平皿中，待凝固后在平板中央點(diǎn)接活化了3-4代的細菌，恒溫培養12-16h后，取擴散菌落的邊緣制作涂片。

    （3）染色

     ①滴加A液，染4-6min.

     ②用蒸餾水充分洗凈A液。

     ③用B液沖去殘水，再加B液于玻片上，在酒精燈火焰上加熱至冒氣，約維持0.5-1min（加熱時(shí)應隨時(shí)補充蒸發(fā)掉的染料，不可使玻片出現干涸區）。

     ④用蒸餾水洗，自然干燥。

    （4）鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。

     結果：菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。

     2. 改良Leifson染色法

    （1）清洗玻片法同1.

    （2）配制染料  見(jiàn)附錄二（一）9.染料配好后要過(guò)濾15-20次后染色效果才好。

    （3）菌液的制備及涂片