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細菌的簡(jiǎn)單染色和革蘭氏染色

    (一)實(shí)驗目的:學(xué)習細菌的簡(jiǎn)單染色法和革蘭氏染色法。


    (二)實(shí)驗原理:用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類(lèi)。堿性染料的離子帶正電荷,能和帶負電荷的物質(zhì)結合。因細菌蛋白質(zhì)等電點(diǎn)較低,當它生長(cháng)于中性、堿性或弱酸性的溶液中時(shí)常帶負電荷,所以通常采用堿性染料(如美藍、結晶紫、堿性復紅或孔雀綠等)使其著(zhù)色。酸性染料的離子帶負電荷,能與帶正電荷的物質(zhì)結合。當細菌分解糖類(lèi)產(chǎn)酸使培養基pH下降時(shí),細菌所帶正電荷增加,因此易被伊紅、酸性復紅或剛果紅等酸性染料著(zhù)色。中性染料是前兩者的結合物又稱(chēng)復合染料,如伊紅美藍、伊紅天青等。


     簡(jiǎn)單染色法是只用一種染料使細菌著(zhù)色以顯示其形態(tài),簡(jiǎn)單染色不能辨別細菌細胞的構造。


     革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram所創(chuàng )立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)和革蘭氏陰性菌(G-)兩大類(lèi),是細菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。


     該染色法所以能將細菌分為G+菌和G-菌,是由這兩類(lèi)菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類(lèi)脂質(zhì),而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低,故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類(lèi)脂質(zhì),增加了細胞壁的通透性,使初染的結晶紫和碘的復合物易于滲出,結果細菌就被脫色,再經(jīng)蕃紅復染后就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高,類(lèi)脂質(zhì)含量少,經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小,通透性降低,因此細菌仍保留初染時(shí)的顏色。


    (三)實(shí)驗器材


     1、活材料:培養12-16h的蘇云金桿菌(Bacillus thuringiensis)或者枯草桿菌(Bacillus subtilis),培養24小時(shí)的大腸桿菌(Escherichia coli


     2、染色液和試劑:結晶紫(附二、(一)、3)、盧哥氏碘液(附二、(一)、4)、95%酒精、蕃紅(附二、(一)、5)、復紅(附二(一)、2)、二甲苯、香柏油


     3、器材:廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡


    (四)實(shí)驗方法:


     1、簡(jiǎn)單染色:


    (1)涂片:取干凈載玻片一塊,在載玻片的左、右各加一滴蒸餾水,按無(wú)菌操作法取菌涂片,左邊涂蘇云金桿菌,右邊涂大腸桿菌,做成濃菌液。再取干凈載玻片一塊將剛制成的蘇云金桿菌濃菌液挑2-3環(huán)涂在左邊制成薄的涂面,將大腸桿菌的濃菌液取2-3環(huán)涂在右邊制成薄涂面。亦可直接在載玻片上制薄的涂面,注意取菌不要太多。


   (2)晾干:讓涂片自然晾干或者在酒精燈火焰上方文火烘干。

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