（一）實(shí)驗目的：學(xué)習細菌的簡(jiǎn)單染色法和革蘭氏染色法。

    （二）實(shí)驗原理：用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類(lèi)。堿性染料的離子帶正電荷，能和帶負電荷的物質(zhì)結合。因細菌蛋白質(zhì)等電點(diǎn)較低，當它生長(cháng)于中性、堿性或弱酸性的溶液中時(shí)常帶負電荷，所以通常采用堿性染料（如美藍、結晶紫、堿性復紅或孔雀綠等）使其著(zhù)色。酸性染料的離子帶負電荷，能與帶正電荷的物質(zhì)結合。當細菌分解糖類(lèi)產(chǎn)酸使培養基pH下降時(shí)，細菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復紅或剛果紅等酸性染料著(zhù)色。中性染料是前兩者的結合物又稱(chēng)復合染料，如伊紅美藍、伊紅天青等。

     簡(jiǎn)單染色法是只用一種染料使細菌著(zhù)色以顯示其形態(tài)，簡(jiǎn)單染色不能辨別細菌細胞的構造。

     革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram所創(chuàng )立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類(lèi)，是細菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。

     該染色法所以能將細菌分為G+菌和G-菌，是由這兩類(lèi)菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類(lèi)脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類(lèi)脂質(zhì)，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的復合物易于滲出，結果細菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復染后就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類(lèi)脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時(shí)的顏色。

    （三）實(shí)驗器材

     1、活材料：培養12-16h的蘇云金桿菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草桿菌（Bacillus subtilis），培養24小時(shí)的大腸桿菌（Escherichia coli）

     2、染色液和試劑：結晶紫（附二、（一）、3）、盧哥氏碘液（附二、（一）、4）、95%酒精、蕃紅（附二、（一）、5）、復紅（附二（一）、2）、二甲苯、香柏油

     3、器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡

    （四）實(shí)驗方法：

     1、簡(jiǎn)單染色：

    （1）涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴蒸餾水，按無(wú)菌操作法取菌涂片，左邊涂蘇云金桿菌，右邊涂大腸桿菌，做成濃菌液。再取干凈載玻片一塊將剛制成的蘇云金桿菌濃菌液挑2-3環(huán)涂在左邊制成薄的涂面，將大腸桿菌的濃菌液取2-3環(huán)涂在右邊制成薄涂面。亦可直接在載玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。

   （2）晾干：讓涂片自然晾干或者在酒精燈火焰上方文火烘干。