一、目的和要求 　　

      1、通過(guò)實(shí)驗加深對定向發(fā)酵的理解。 　　

      2、學(xué)習利用沉淀或溶媒法提取四環(huán)類(lèi)抗生素的操作技術(shù)。

二、原理 　　

      金霉素在化學(xué)結構上與四環(huán)素十分相似，區別僅在C-7位上，以Cl取代了H。所以，金霉素又稱(chēng)為7-氯四環(huán)素。金霉素鏈霉菌是金霉素的產(chǎn)生菌，但當培養基中存在抑氯物質(zhì)時(shí)，由于氯的摻入受阻，而使得金霉素鏈霉菌的生物合成方向發(fā)生變化，并使四環(huán)素成為主要產(chǎn)物。 　　本實(shí)驗以M-促進(jìn)劑（硫醇苯駢噻唑）作為氯化霉的抑制劑，以溴化鈉作為競爭性抑制劑進(jìn)行四環(huán)素的定向發(fā)酵。四環(huán)素是兩性化合物，通?？梢圆捎贸恋矸?、溶媒萃取法或離子交換法進(jìn)行提取。本實(shí)驗采用了前2種方法，它們的分離主要是利用了四環(huán)素既可以與酸、堿反應，同時(shí)又可以與某些金屬離子形成鹽類(lèi)，及其在不同溶劑、不同pH值時(shí)溶解度不同的特性，進(jìn)行反復萃取，最后通過(guò)精制結晶和洗滌而獲得成品。

 三、實(shí)驗材料 　　

      1、菌種：金霉素鏈霉菌（Streptomyces aureofaciens） 　　

      2、培養基：斜面菌種用麥仁培養基，300ml三角瓶中分裝25ml四環(huán)素種子培養基，500ml三角瓶中分裝50ml發(fā)酵培養基，共4種。 　　

      3、四環(huán)素發(fā)酵液（發(fā)酵液效價(jià)≥10,000u/ml）。 　　

      4、化學(xué) 試劑 ：草酸，EDTA混合 試劑 ，2mol/L HCl，黃血鹽，ZnSO 4 ，2mol/L HCl，11% HCl，20% HCl，MgCl 2 ，CaCl 2 ，20%乙醇溶液，氨水，Na 2 CO 3 /NaOH 　?。?：1）混合堿，20% NaOH，pH分別為2、4.5的酸水，4% HCl/正丁醇（1：10），丙酮。 　

      5、滅菌物品：10ml破口吸管。 　　

      6、其它：接種用具，50ml、100ml、500ml三角瓶，50ml、100ml、500ml燒杯，滴管，50ml容量瓶，100ml量筒，50ml 離心管 ，玻璃漏斗，濾紙，玻璃棒，精密pH試紙， 水浴 鍋，搖床，剪刀，天平，布氏漏斗，結晶皿，稱(chēng)量瓶，藥勺， 真空泵 ，抽濾

四、實(shí)驗實(shí)施 　　

      1、制備斜面孢子：將活化的金霉素鏈霉菌接入麥仁培養基斜面，35～37℃培養5天。 　　

      2、制備種子：將約1cm2的麥仁孢子接入25ml四環(huán)素種子培養基中，200r/min、28℃下振蕩培養20h，擴繁1次。 　　

      3、發(fā)酵：以破口 吸管 取2.5ml種子液接入50ml發(fā)酵培養基中，200r/min、28℃下振蕩培養5天。 　　

      4、四環(huán)素的沉淀提取

（本文轉載：丁香通）