酵母總RNA提取方法
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發(fā)布時(shí)間：2016-11-02
問(wèn)： 請問(wèn)大家提取酵母的總RNA都用什么方法？有好用的試劑盒嗎？酵母總RNA提取應該注意什么？
答：使用熱酚法抽提酵母RNA,很好用，至今沒(méi)有失敗過(guò)。
(1) 將酵母細胞培養在3ml選擇性培養基中，30℃過(guò)夜旋轉培養。
(2) 稀釋過(guò)夜培養的菌液，重新在10ml培養基中培養細胞。
(3) OD600達到1.0時(shí)，收菌，4000rpm/min離心5min,棄培養基。
(4) 將細胞懸浮于400μl AE緩沖液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 調整pH值至5.2）。
(5) 加入1/10體積的10% SDS，充分混合。
(6) 加入等體積在65℃預熱的酸性酚（pH4.5），混合。
(7) 65℃加熱5min，冰上放置10min。
(8) 在室溫下8000rpm/min離心10min。
(9) 取水相,加入等體積的酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min離心8min。
(10) 取水相，加入等體積氯仿/異戊醇（49∶1）10000rpm/min離心8min。
(11) 加入1/10體積3M pH5.2的醋酸鈉，2.5倍體積的純乙醇，-20℃過(guò)夜沉淀。
(12) 沉淀樣品于4℃離心5min，去除液體。
(13) 在冰上干燥RNA（放置15min），最后用適量DEPC水溶解RNA。
