酵母表達
發(fā)布人：admin
瀏覽次數：997
發(fā)布時(shí)間：2016-11-03
經(jīng)過(guò)不斷的努力，終于得到酵母表達陽(yáng)性結果。特把表達的一些心得寫(xiě)下來(lái)，希望對正在努力中的XDJM有所幫助，也以此感謝丁香園對我的幫助。
分泌型載體：pPICZaC 宿主菌：X33 培養基：BMGY/BMMY 目的蛋白：20KD
1、表達過(guò)程中防止污染是第一關(guān)鍵，酵母太容易污染 了。在用BMGY激活培養時(shí)，可進(jìn)行挑單菌落培養24h,而不用常規的1％接種。搖床可定期用75％酒精噴灑消毒。
2、如果只是檢測用，用試管小量培養。先前用250ml的錐形瓶培養，既浪費材料，又耗費精力。目前表達出來(lái)的蛋白就是在試管（十幾，二十ml的那種）培養的。
3、 1.5ml的BMGY激活24h后，換液，BMMY也用1.5ml.用多少的BMMY決定了你的蛋白表達出來(lái)的濃度。用等體積換液，表達完收獲的上清不用濃縮，直接上SDS-PAGE。如果擔心濃度不夠，可縮小BMMY的體積，那實(shí)際上也等于在濃縮上清。先前采用大量培養再取上清進(jìn)行TCA-丙酮法，丙酮法，氯仿－乙醇法濃縮，效果都不好。
