1.原代細胞與細胞系有什么區別？

 

    細胞培養物來(lái)源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義，第一次收獲和接種的細胞被稱(chēng)為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類(lèi)細胞生命周期有限，在有限的生命周期內需掌握好細胞最大的生長(cháng)空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。

 

    細胞系是不斷生長(cháng)，分化的細胞群，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(cháng)的潛能。體外生長(cháng)的細胞系用于醫療或科研。實(shí)際上，連續細胞系可以用大量次培養基培養，隨著(zhù)代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。

 

    需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì )有所不同。許多研究員不用細胞系這個(gè)詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造。

 

2.倍增和代數有什么區別？

 

    倍增是培養物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長(cháng)期。代數是指細胞群從培養瓶中移出，傳代培養過(guò)程的次數，傳代培養的目的是使細胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(cháng)。

 

3.接收到的凍存細胞該如何處理？

 

    收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過(guò)程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會(huì )對細胞造成不可挽回的傷害。

 

4.有多少經(jīng)驗才能開(kāi)始正常人類(lèi)細胞培養？

 

    推薦有經(jīng)驗者在無(wú)菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話(huà)對其它細胞類(lèi)型也是很有利的。如果你是細胞培養的初學(xué)者或打算建立細胞培養實(shí)驗室，我們會(huì )為你提供幫助。請聯(lián)系我們的細胞培養專(zhuān)家。

 

5.凍存的細胞該如何開(kāi)始培養？

 

    ⑴將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。

 

    ⑵用10秒鐘時(shí)間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮，然后將蓋子蓋緊。

 

    ⑶將小管放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉，直到管內物體完全融化。

 

    ⑷將小管立即從水浴中拿出，擦干，轉入無(wú)菌環(huán)境。

 

    ⑸用70％的酒精沖洗小管，然后擦去多余酒精。

 

    ⑹打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內容物。

 

    ⑺平衡管內物，用多聚賴(lài)氨酸包被培養瓶(多數細胞用T-75的培養瓶)。多數細胞類(lèi)型推薦接種密度為每平方厘米5000細胞。

 

    ⑻蓋好蓋子，輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開(kāi)蓋子。

 

    ⑼將培養瓶放放培養箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)

 

    ⑽植入培養后第6-16小時(shí)更換一次培養基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。

 

6.當我第一次植入正常人類(lèi)細胞時(shí)需要旋轉細胞去除二甲基亞楓嗎？

 

    第一次植入正常凍存細胞時(shí)，我們不推薦旋轉去除二甲基亞楓。離心過(guò)程比殘留二甲基亞楓對細胞的傷害更大，尤其是不正當的高速旋轉。我們的經(jīng)驗是如果二甲基亞楓的濃度很低，細胞不會(huì )受毒害。如果你將1ml細胞植入已加入15ml培養基的T-75培養瓶中，二甲基亞楓的濃度將小于0.67％，沒(méi)有發(fā)現負面影響。實(shí)際上，如果細胞的接種密度為每平方厘米5000-10000，二甲基亞楓的濃度很低。

 

7.多久更換一次培養基？

 

    一般2-3天更換一次培養基，這取決于細胞生長(cháng)的速度。許多細胞培養實(shí)驗室通常在周一，周三，周五更換培養基。

 

    注意：第一次植入凍存的細胞后，在6-16小時(shí)內更換培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細胞。

 

8.我能擴培和再冰凍ScienCell的正常人類(lèi)細胞嗎？

 

    這取決于細胞類(lèi)型。一些細胞類(lèi)型像神經(jīng)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長(cháng)緩慢的上皮細胞不推薦擴培和再冰凍。其它的細胞類(lèi)型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質(zhì)細胞等等可以擴培和再冰凍。然而，需要注意的是再冰凍的過(guò)程可能導致細胞生長(cháng)性能的改變。如果你想要再冰凍細胞，請親自咨詢(xún)我們的技術(shù)支持并使用ScienCell SF-CFM，和特定的無(wú)血清培養基，以獲得最好的效果。

 

9.我能長(cháng)時(shí)間凍存ScienCell的培養基嗎？

 

    不推薦凍存培養基，冰凍高營(yíng)養的培養基將導致培養基成分不可逆降解。

 

10.培養瓶中應該加入多少體積的培養基？

 

    推薦用量：T-25培養瓶5ml,T-75培養瓶15ml,T-150培養瓶30ml。

 

11.使用你們的專(zhuān)業(yè)培養基，還需要另外的補充物嗎？

 

    ScienCell公司的培養基是為每一類(lèi)細胞特定研制的。加入相關(guān)的培養成分(生長(cháng)因子，抗生素和胎牛血清)到基本培養液中，你就得到了完全培養基。其它的不再需要。

 

12.完全培養基的保質(zhì)期是多久？

 

    加入所有的補充物后，培養液就成了完全培養基。如果完全培養基儲存在4℃條件下，并且每次使用時(shí)置于常溫的時(shí)間盡量少，完全培養基的保質(zhì)期為6周。

13.可以使用自己的或其它公司的培養基培養ScienCell的正常人類(lèi)細胞嗎？

 

    ScienCell公司的正常人類(lèi)細胞使用我們的完全培養基培養并通過(guò)測試，細胞已適應此完全培養基。使用其它的培養基，由于需要適應過(guò)程可能會(huì )導致細胞不良生長(cháng)。我們推薦使用我們特定的培養基培養正常人類(lèi)細胞。

 

14.正常人類(lèi)細胞能傳多少代？

 

    ScienCell不使用代數描述細胞的生長(cháng)潛能，因為每一位客戶(hù)用不同的分流比。ScienCell研究室保證在培養過(guò)程中使用我們的培養基和試劑，正常人類(lèi)細胞達到15倍增倍增(除了在說(shuō)明書(shū)中已指明的)。

 

15.正常人類(lèi)細胞推薦的分流比是多少？

 

    ScienCell公司不推薦對正常人類(lèi)細胞使用分流比，因為在用胰酶處理后細胞的產(chǎn)量會(huì )有所變化。我們推薦在胰酶作用后對細胞計數，接種密度為5000-10000細胞每平方厘米(在細胞說(shuō)明書(shū)中有推薦接種密度)。

 

16. 可以使正常人類(lèi)細胞處于實(shí)驗性饑餓嗎？

 

    可以將ScienCell 公司的正常人類(lèi)細胞處于實(shí)驗性饑餓。細胞在沒(méi)有添加物的基本培養基中可以維持一段時(shí)間，但細胞必須處于良好的環(huán)境中。過(guò)了這段時(shí)期，實(shí)驗應終止，因為時(shí)間過(guò)長(cháng)將導致細胞死亡。最好在實(shí)驗前測試一下細胞在饑餓條件下能存活多長(cháng)時(shí)間，這取決于多種因素。

 

17. 可以用質(zhì)粒DNA轉染正常人類(lèi)細胞嗎？

 

    當然，我們已成功轉染了多種細胞，比如皮膚成纖維細胞，肺成纖維細胞，皮膚微血管內皮細胞等等