細胞原代培養可以：

（1）為研究生物體細胞的生長(cháng)、代謝、繁殖提供有力的手段；

（2）為傳代培養創(chuàng )造條件；

（3）服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。

胰酶消化法組織塊直接培養法
實(shí)驗方法原理：  將動(dòng)物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長(cháng)和繁殖，這一過(guò)程稱(chēng)原代培養。因此，較為嚴格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養，此時(shí)的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實(shí)際上，通常把第一代至第十代以?xún)鹊呐囵B細胞統稱(chēng)為原代細胞培養。最常用的原代培養有組織塊培養和分散細胞培養。
 
實(shí)驗材料： 胎鼠新生鼠
試劑、試劑盒： 1640培養基牛血清胰酶Hank’s液碘酒
儀器、耗材： 培養箱培養瓶青霉素瓶小玻璃漏斗平皿吸管移液管紗布手術(shù)器械血球計數板離心機水浴箱

 實(shí)驗步驟：

 一、實(shí)驗材料準備

1.  Hank’s液配方：KH2PO4 0.06 g，Nacl 8.0 g，NaHCO3 0.35 g，KCl 0.4 g，葡萄糖1.0 g，Na2HPO4·H2O 0.06 g，加H2O至 1 000 ml。Hank’s液可以高壓滅菌。4℃下保存。

二、具體操作

1.  將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2-3秒鐘（時(shí)間不能過(guò)長(cháng)、以免酒精從口和肛門(mén)浸入體內）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠帶入超凈臺內（或將新生小鼠在超凈臺內）解剖取肝臟，置平皿中。
 
2.  用Hank’s液洗滌三次，并剔除脂肪，結締組織，血液等雜物。
 
3.  用手術(shù)剪將肝臟剪成小塊（1 mm2），再用Hank’s液洗三次，轉移至小青霉素瓶中。
 
4.  視組織塊量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
 
5.  加入3-5 ml培養液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）。
 
6.  靜置5-10分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。
 
7.  1 000 rpm，離心10分鐘，棄上清液。
 
8.  加入Hank’s液5 ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
 
9.  加入培養液1-2 ml（視細胞量），血球計數板計數。
 
10.  將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至25 ml細胞培養瓶中，37℃下培養。
  

注意事項 ：

 1.  自取材開(kāi)始，保持所有組織細胞處于無(wú)菌條件。細胞計數可在有菌環(huán)境中進(jìn)行。
 
2.  在超凈臺中，組織細胞、培養液等不能暴露過(guò)久，以免溶液蒸發(fā)。
 
3.  凡在超凈臺外操作的步驟，各器皿需用蓋子或橡皮塞，以防止細菌落入。

4.  操作前要洗手，進(jìn)入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。

5.  點(diǎn)燃酒精燈，操作在火焰附近進(jìn)行，耐熱物品要經(jīng)常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時(shí)間不能太長(cháng)，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過(guò)營(yíng)養液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。
 
6.  操作動(dòng)作要準確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機會(huì )。
 
7.  不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺面上用品要布局合理。
 
8.  瓶子開(kāi)口后要盡量保持45°斜位。
 
9.  吸溶液的吸管等不能混用。