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酶組織化學(xué)的基本原理

     酶組織化學(xué) 是顯示酶的活性,即顯示酶的催化作用,而不是酶本身,酶本身并不發(fā)生反應。在一定pH和適宜溫度條件下,組織或細胞中的酶與孵育液中的特異性酶作用底物反應.催化底物形成無(wú)色初級反應產(chǎn)物,后者再與某種捕捉劑結合,形成有色的終產(chǎn)物沉淀于酶所在部位,使組織切片中的酶變成顯微鏡下的可見(jiàn)物。倘若此反應產(chǎn)物仍然無(wú)色,則需再經(jīng)置換劑處理,使五色的反應產(chǎn)物沉淀被置換為有色的最終反應產(chǎn)物。組織細胞內的各種酶僅有少數酶能用于組織化學(xué)染色,大部分要通過(guò)上述基本原理間接證明酶 的存在。


     1.初級反應產(chǎn)物(initial reaction product,IRP)  是指底物被酶直接分解產(chǎn)生的物質(zhì)。理想的初級反應產(chǎn)物應是既不溶于水,也不溶于脂類(lèi)的,以免發(fā)生擴散。


     2.最終反應產(chǎn)物(final reaction product,FRP)  是指不溶性初級反應產(chǎn)物可經(jīng)偶聯(lián)和捕捉反應而呈色。


     3.偶聯(lián)和捕捉(coupling and capture)  是指生物合成中,在同一時(shí)間內進(jìn)行兩種在性質(zhì)上完全相反的化學(xué)反應,如一個(gè)放能反應和一個(gè)吸能反應同時(shí)進(jìn)行,即為偶聯(lián)。放出的能量,常不是直接被利用,而是先被某些化合物捕獲(吸能)。機體內最為重要的偶聯(lián)反應和捕捉活動(dòng)是氧化磷酸化。


     酶具有只作用于該酶底物的性質(zhì),稱(chēng)為底物特異性(substrate specificity)。但是,偶爾也有一種底物可以被兩種或兩種以上酶分解的情況,這樣,在底物混合液中孵育組織切片時(shí),一個(gè)底物可能同時(shí)發(fā)生幾種酶反應,為獲得特異酶反應,必須使用酶抑制劑或酶激活劑進(jìn)行鑒別。

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