基本方案：   灌注消化法

     實(shí)驗材料：

     1.  哺乳動(dòng)物胸導管淋巴管

     2.  1×PBS，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.4

     3.  0.2%Ⅰ型膠原酶

     4.  慕絲線(xiàn)（7號線(xiàn)）、細鐵絲

     5. 眼科剪，眼科鑷

     6.  離心管（15ml、50ml）

     實(shí)驗方法：

     1.  處死動(dòng)物后，打開(kāi)胸腔，分離胸導管，在胸導管上端結扎，切取10-15cm的一段。將胸導管放入預冷PBS中漂洗。

     2.  在解剖顯微鏡下，用眼科剪和眼科鑷剝除外膜的脂肪和纖維組織，然后用PBS反復沖洗管腔。

     3.  將胸導管移入含PBS的大培養皿中，清洗3次。在胸導管的遠端插入靜脈留置針，并結扎固定。用PBS沖洗管腔后，將游離端結扎。用靜脈留置針向管腔內注入消化液，至淋巴管充盈為止。在37℃條件下，消化10min。淋巴管的管壁較薄，灌注消化時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)，以免消化過(guò)度，引起成纖維細胞的污染。

     4.  取出胸導管，在游離端剪一小口，用離心管收集消化液，然后用培養液沖洗管腔，收集消化液和沖洗液，以1000r/min，離心10min。離心后吸去上清液，用培養液輕輕混懸細胞。

     5.  將細胞接種于培養皿或培養板中，培養24h后補充培養液，繼續培養。每隔2-3d換液1次。換液時(shí)，吸去1/2-2/3培養液，再加入新鮮培養液。

     6.  原代培養4-6h后，大部分細胞已貼壁生長(cháng)。24h后，內皮細胞形成由數個(gè)細胞組成的細胞群。淋巴管內皮細胞的活性較低，原代培養時(shí)細胞生長(cháng)緩慢。2-3周后，細胞生長(cháng)形成單層。淋巴管內皮單層呈卵石狀特征性排列，可傳代培養。

     7.  PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基

     8.  PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑

     9.  PriCells-原代細胞分離試劑盒

     10.  PriCells-原代細胞 鑒定 試劑盒