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細胞培養注意事項

  a.實(shí)驗進(jìn)行前,先擺好操作臺,開(kāi)啟操作臺及無(wú)菌室紫外燈滅菌30-60min;


  b.滅菌后關(guān)閉無(wú)菌室、操作臺紫外,并開(kāi)啟日光燈15-20min后打開(kāi)操作臺和無(wú)菌室加裝濾網(wǎng)的通風(fēng)系統5-10min以降低臭氧濃度(減少對操作人員的傷害),開(kāi)始實(shí)驗。


  c. 實(shí)驗人員必須穿好實(shí)驗服,戴好口罩及手套后方可進(jìn)入實(shí)驗室。這一方面可以減少無(wú)菌室的污染,一方面可以保護實(shí)驗員的安全。對于來(lái)自人類(lèi)或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級之無(wú)菌操作臺,并且操作期間切不可弄傷手部及接觸感染源的皮膚。


  d.實(shí)驗操作前用75%酒精擦拭工作區域,并應在抬面之中央無(wú)菌區域,勿在邊緣之非無(wú)菌區域操作,在酒精燈附近操作。


  e.實(shí)驗時(shí)避免經(jīng)過(guò)培養皿或試劑瓶上空,小心取用無(wú)菌之實(shí)驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口。


  g.為防止交叉污染,細胞培養液(DMEM、RPMI-1640等)應分裝標記使用。一種細胞使用對應瓶分裝的培養基。


  h.培養基使用前調整溫度至37℃。


  I.Trypsin、FBS、NBS應分裝使用,避免反復凍融。


  j.經(jīng)常檢查細胞培養箱內的CO2的濃度、溫度、濕度等,查看CO2 鋼瓶的內外壓力表,定期檢查操作臺及無(wú)菌室的通風(fēng)過(guò)濾系統、紫外殺菌燈等,并注意維護,定期更換。

  附:
  紫外線(xiàn)殺菌器:

一、紫外線(xiàn)殺菌器殺菌原理

  是利用紫外線(xiàn)燈管輻照強度,即紫外線(xiàn)殺菌燈所發(fā)出之輻照強度,與被照消毒物的距離成反比。當輻照強度一定時(shí),被照消毒物停留時(shí)間愈久,離殺菌燈管愈近,其殺菌效果愈好,反之愈差。


  紫外線(xiàn)殺菌燈在紫外線(xiàn)UV-C波段內,其中250-270nm范圍內殺菌力最強,由于汞的共振譜線(xiàn)為2537A,這種殺菌管能產(chǎn)生253.7nm的紫外線(xiàn),使細菌和病毒DNA和RNAV發(fā)生變性,細胞不能繁殖。紫外線(xiàn)消毒燈對任何細菌或病毒都有效,集中高強度紫外線(xiàn)在短時(shí)間內即可殺菌,廣泛應用于空氣,種類(lèi)材質(zhì)表面,水或其它液體的消毒殺菌。


二、注意事項:


  1.紫外線(xiàn)對皮膚和眼睛會(huì )造成灼傷,請注意防護,避免較長(cháng)時(shí)間對人體的直接照射。


  2.紫外線(xiàn)對有機細胞有殺傷作用,請勿對寵物和植物長(cháng)期照射。


  3.注意地室內名貴書(shū)畫(huà)進(jìn)行遮擋,以防長(cháng)時(shí)間紫外線(xiàn)照射氧化變色。


  4.勿將殺菌燈作為照明燈使用,消毒以適度為宜,不提倡長(cháng)時(shí)間開(kāi)著(zhù)紫外燈。


  5.清潔紫外線(xiàn)燈時(shí),請切斷電源,使用干凈的軟布或酒精輕擦,忌用汽油等有機溶液擦拭。


  6.防止兒童玩耍和接觸。


  7.對房間消毒完后,請即開(kāi)開(kāi)窗通風(fēng)。

三、維護保養:


    紫外線(xiàn)燈管表面的灰塵和油垢,會(huì )阻礙紫外線(xiàn)的穿透,使用中應注意燈管的擦拭與保潔,新燈管使用前,可先用75%酒精擦拭。使用過(guò)程中一般每2周擦拭一次,發(fā)現燈管表面有灰塵、油污時(shí),應隨時(shí)擦拭,保持燈管的污痕和透明,以免影響紫外線(xiàn)的穿透及輻射強度。





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