流式細胞術(shù)檢測細胞周期 

    1.實(shí)驗原理  用流式細胞儀檢測細胞周期，通常用碘化丙啶（propidium iodide，PI）染細胞核。PI在一定波長(cháng)的光下發(fā)出熒光，其強度與DNA含量成正比。通過(guò)流式細胞儀分析各時(shí)期的細胞百分數，可檢測細胞的增殖、凋亡。 

    實(shí)驗原理

    在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側。AnnexinV是一種分子量為35～36 kD的Ca2＋依賴(lài)性磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故可通過(guò)細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此AnnexinV被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。  碘化丙啶（PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細胞膜，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過(guò)細胞膜而使細胞核染紅。因此將AnnexinV與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細胞區分開(kāi)來(lái)。

流式細胞儀檢測A549細胞凋亡

    收集對數生長(cháng)期A(yíng)549細胞，計數，以(1～5)×105個(gè)/孔接種于6孔板，置37℃，5％CO2條件下培養過(guò)夜，使細胞貼壁；次日更換培養液，各孔分別加入含有不同濃度茶氨酸的細胞培養液2 mL/孔，繼續常規培養；每24 h同法換液一次；  在藥物處理48 h后，以不含EDTA的胰酶消化并收集細胞于流式管1000 r/min離心5 min，棄上清。冷PBS洗滌細胞3次，離心棄上清；  按照Annexin-V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒的說(shuō)明，向細胞中加入Binding buffer 150 μL/管和Annexin-V 5 μL/管，振蕩混勻。室溫、避光反應15 min；  再次加入Binding buffer 100 μL/管和PI染料5 μL/管，振蕩混勻； 用流式細胞儀檢測細胞凋亡。  

    結果判斷  

    凋亡細胞對所有用于細胞活性鑒定的染料如 PI 有抗染性，壞死細胞則不能。