實(shí)驗背景

    生長(cháng)曲線(xiàn)是細胞數量隨培養時(shí)間而變化的曲線(xiàn)?？煞譃閹讉€(gè)階段：

    潛伏期：即細胞對傳代操作所致?lián)p傷的恢復期或對新生長(cháng)環(huán)境的適應期。細胞修復自身?yè)p傷，熟悉新環(huán)境，恢復生長(cháng)。原代培養細胞潛伏期較長(cháng)，一般24-96h或更長(cháng)。連續培養細胞系潛伏期短，一般6-24h。

    指數生長(cháng)期，或稱(chēng)對數生長(cháng)期：是細胞增生最活躍、活力最旺盛的階段，培養物中的細胞呈指數生長(cháng)。指數生長(cháng)期內細胞增值活動(dòng)的程度可以作為判斷細胞生長(cháng)是否旺盛的重要指標。常以有絲分裂指數（MI）、細胞群體倍增時(shí)間來(lái)表示。指數生長(cháng)期時(shí)細胞一代中活力最好的時(shí)期，因此是進(jìn)行各種實(shí)驗的主要階段。

    停滯期也指平臺期：細胞經(jīng)過(guò)指數生長(cháng)期后達到較高的密度，培養基中的養分也消耗較大，培養液中代謝廢物積聚較多，細胞不再分裂增殖，細胞數量維持在某一水平上，生長(cháng)活動(dòng)停滯。但細胞人存在代謝活動(dòng)，此時(shí)，若要使細胞恢復生長(cháng)，應該立即傳代。

    生長(cháng)曲線(xiàn)的測定是測定細胞絕對生長(cháng)數的常用方法，也是判定細胞活力的重要指標，是培養細胞生物學(xué)特性的基本參數之一。除使用計數法測定細胞的生長(cháng)曲線(xiàn)外，還可以可以使用MTT比色法。其原理是：MTT被活細胞中的線(xiàn)粒體琥珀酸脫氫酶還原后，生成暗藍色甲瓚（Formazan），甲瓚被助溶劑溶解后，可在酶標儀上于570nm處讀取OD值，在一定范圍內OD值與活細胞數量呈線(xiàn)性關(guān)系。因此，OD值可間接地反應活細胞的狀態(tài)。接種培養細胞后每天定時(shí)去除細胞，驚喜MTT檢測，可以得到細胞生長(cháng)曲線(xiàn)。用MTT發(fā)可以檢測某些藥物作用下細胞生長(cháng)活力的變化，靜兒評價(jià)藥物對細胞存貨和生長(cháng)的作用。測定細胞生長(cháng)的另一個(gè)指標是有絲分裂指數，為計數1000個(gè)細胞中分裂細胞數，可以檢測細胞增殖旺盛的程度。

細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的繪制（MTT法）

1、 無(wú)菌培養實(shí)驗室準備（同細胞傳代培養），從CO2培養箱中去除細胞，棄去培養液，加入0.25%的胰蛋白酶消化細胞，棄去胰蛋白酶液，使用新的含10%小牛血清的培養基制成細胞懸液后計數。

2 、按照4×103細胞/孔接種于96孔板，0.2ml培養基/孔（如果是懸浮細胞，則0.1ml培養基/孔），做傳代培養。設置3個(gè)空白對照孔，只加無(wú)細胞的培養基。

3、 24h后加入待檢藥品，可加入幾種不同濃度的待檢藥品。對照組不加藥，24h時(shí)選取其中3個(gè)孔更換新鮮培養基100ul，加入0.01ml的MTT（5mg/ml）放回37℃孵育4h，之后加入100ul的裂解液，
37℃過(guò)夜。

4 、5天后統一在酶標儀上于570nm下檢測，得出OD值（或者加入裂解液后過(guò)夜每天檢測）。以空白對照調節零點(diǎn)。

注意事項：

1 、接種細胞要準確，接種時(shí)要充分使細胞混勻，防止細胞沉淀造成細胞接種不均。

2 、MTT溶液見(jiàn)光后顏色會(huì )逐漸變深，因此在加入裂解液后96孔培養板應避光孵育/處理。

3 、可以在全部MTT實(shí)驗做完后一起上機檢測OD值，但前提是前面已經(jīng)做完了的須避光處理。也可采取加入裂解液后每天檢測一次OD值，但使用的酶標儀應該性能穩定，隔天檢測結果應一致。