D-Hanks液的配制
(1)Hanks和D-Hanks液的成分比較。
(2)依次加入藥品至800mL蒸餾水中,溶解后定容至1000mL。分裝成100mL/瓶,其中1瓶加入終濃度0.02%和DETA,準備配制胰蛋白酶。
(3)高壓滅菌,10MPa,10min。
胰蛋白酶消化液的配制
(1)在D-Hanks液高壓滅菌之后,晾至室溫,4℃保存備用。
(2)稱(chēng)取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天時(shí)研磨器應放在冰浴中),加入少量D-Hanks液碾磨100~1000次,調制成糊狀。再放入4℃預冷的適量D-Hanks液中,4℃下磁力攪拌使完全溶解(一般4~12h)。
(3)用NaHCO3干粉將胰酶溶液的pH調至8.0左右(胰酶作用的最適pH為8.2)。
(4)過(guò)濾除菌(方法見(jiàn)前篇培養基的配制),—20℃保存。