亚洲国产一级毛片视频-无码人妻久久一区二区三区-国产一级黄色毛片视频-精品中文字幕久久久久久-亚洲精品影院综合在线观看

新浪微博
微信互動(dòng)

細胞實(shí)驗技術(shù)及基本知識(一)

細胞培養技術(shù)





細胞周期的測定


一、原理


      細胞周期指細胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個(gè)周期。細胞周期反應了細胞增殖速度?! 蝹€(gè)細胞的周期測定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現多采用其他方法測群體周期?! y定細胞周期的方法很多,有同位素標記法、細胞計數法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法?! rdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養基后,可做為細胞DNA復制的原料,經(jīng)過(guò)兩個(gè)細胞周期后,細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應表現為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個(gè)周期,則染色體中約一半為兩條單體均淺染,另一半為一深一淺。細胞如果僅經(jīng)歷了一個(gè)周期,則兩條單體均深染。計分裂相中各期比例,就可算出細胞周期的值。


二、儀器、用品與試劑


      1、儀器、用品:同常規細胞培養
      2、試劑:BrdU(1.0mg/ml),甲醇、冰醋酸,Giemsa染液,秋水仙素,2×SSC液


三、操作步驟


      1、細胞生長(cháng)至指數期時(shí),向培養液中加入BrdU,使最終濃度為10μg/ml?! ?/span>

      2、44小時(shí)加秋水仙素,使每ml中含0.1μg?! ?/span>

      3、48小時(shí)后常規消化細胞至離心管中,注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中?! ?/span>

      4、常規染色體制片(見(jiàn)第三部分:染色體技術(shù))?! ?/span>

      5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘?! ?/span>

      6、棄去2×SSC液,流水沖洗?! ?/span>

      7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干?! ?/span>

      8、鏡檢100個(gè)分裂相,計第一、二、三、四細胞期分裂指數?! ?/span>

      9、計算:細胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小時(shí))

附:

      (1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml   4℃下避光保存?! ?/span>

      (2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉-2H2O0.88克,加水至100ml,4℃保存。


細胞的凍存和復蘇


一、原理

      

      在不加任何條件下直接凍存細胞時(shí),細胞內和外環(huán)境中的水都會(huì )形成冰晶,能導致細胞內發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等,能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑,可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細胞復蘇時(shí)速度要快,使之迅速通過(guò)細胞最易受損的-5~0℃,細胞仍能生長(cháng),活力受損不大。

      目前常用的保護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無(wú)毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。


      (本文轉載:丁香通)

上一篇:如何把細胞養得更漂亮
下一篇:如何優(yōu)化您的免疫細胞培養?
分享到: