細胞周期的測定

一、原理

二、儀器、用品與試劑

三、操作步驟

      1、細胞生長(cháng)至指數期時(shí)，向培養液中加入BrdU，使最終濃度為10μg/ml?！　?/span>

      2、44小時(shí)加秋水仙素，使每ml中含0.1μg?！　?/span>

      3、48小時(shí)后常規消化細胞至離心管中，注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中?！　?/span>

      4、常規染色體制片（見(jiàn)第三部分：染色體技術(shù)）?！　?/span>

      5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘?！　?/span>

      6、棄去2×SSC液，流水沖洗?！　?/span>

      7、Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗，晾干?！　?/span>

      8、鏡檢100個(gè)分裂相，計第一、二、三、四細胞期分裂指數?！　?/span>

      9、計算：細胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小時(shí)）

附：

      （1）BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml   4℃下避光保存?！　?/span>

      （2）2×SSC配制： NaCl 1.75克，檸檬酸三鈉-2H2O0.88克，加水至100ml，4℃保存。

細胞的凍存和復蘇

一、原理

      在不加任何條件下直接凍存細胞時(shí)，細胞內和外環(huán)境中的水都會(huì )形成冰晶，能導致細胞內發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細胞復蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過(guò)細胞最易受損的-5～0℃，細胞仍能生長(cháng)，活力受損不大。

      目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細胞無(wú)毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。

      （本文轉載：丁香通）