頭一次培養L929細胞，手忙腳亂的，把冷凍的細胞直接放進(jìn)培養基里就結束了。過(guò)了60個(gè)小時(shí)，去顯微鏡下看，只能看到幾個(gè)帖壁細胞。仔細想想做實(shí)驗的步驟，又上網(wǎng)查查帖子，覺(jué)得可能是沒(méi)有在第二天換新培養基的問(wèn)題，導致冷凍液里的DMSO影響細胞貼壁。不知道培養皿里的細胞還有沒(méi)有活下去的可能?？傊谝淮巫鰧?shí)驗結果不好也不應該輕易放棄。
把培養皿里的上清液轉移到離心管里，離心，加入新的培養基重新放到培養箱里培養，原來(lái)的培養皿除掉上清液后直接加入新的培養基，因為里面還可以看到一些貼壁的細胞。雖然數量很少。
還有幾個(gè)可能的原因導致培養的不好。
1.RPMI是2年前買(mǎi)的，雖然一次沒(méi)有用過(guò)，可是總覺(jué)得別扭。
2.把冷凍的細胞加培養基里面時(shí)，培養基忘記回溫到37度了。
3.細胞在-80度的冰箱里大概有1，2年了，還活著(zhù)嗎？
照片是培養了60個(gè)小時(shí)的細胞。去除上清后重新加入培養基，能看到幾個(gè)貼壁細胞，希望優(yōu)勝劣汰的原則在這里適用，活下來(lái)的都是好同志哈哈哈。
離心后加入新的培養基的細胞，圓圓的，希望你們也不要死啊，要死死遠一點(diǎn)，晚上過(guò)10個(gè)小時(shí)再來(lái)觀(guān)察 。
星期三，周日第二次繼代的L929似乎比以前好些了，數量依舊很少，慶幸昨天沒(méi)有心急把細胞全扔掉?？磥?lái)復蘇確實(shí)需要一個(gè)很長(cháng)的過(guò)程。
今兒提高血清濃度有些難辦，僅有的50ml血清被小老板用了，馬上預定也要后天才到，我決定把培養基里多加些氨基酸，周四也就是明天做第三次傳代，估計第四次傳代的時(shí)候就可以用上增加血清的培養液了。真想和活下來(lái)的細胞握握手，發(fā)個(gè)勛章什么的
小問(wèn)題？
我照的照片背景是綠色的，培養基是粉紅色的，我在A(yíng)TCC和 Cell Bank上看到的照片是黑色的，請問(wèn)有經(jīng)驗的戰友在顯微鏡下給細胞照紀念照片有什么特殊的要求嗎？我用的是NIKON995加轉接頭在顯微鏡下照的。
細胞數比昨日猛增，但只是在某幾個(gè)個(gè)區域，并不是在整個(gè)培養皿中，所以依舊僅僅是抽取出舊的培養基，加入新的培養基，培養基并沒(méi)有什么變化，和第一次的一樣。決定再繼續培養24-48小時(shí)，然后做一次消化，把細胞提出來(lái)重新加培養基，可能的話(huà)就要做冷凍了。
問(wèn)題如下：
1.看到很多別的東西，有的像ZIP拉鏈，有的像梭子，還有一些透明的亮亮的東西。不知道是啥？準備上網(wǎng)找找答案，知道的戰友也可以幫助說(shuō)說(shuō)哈。
2.照片依舊不是很理想，希望有經(jīng)驗的戰友說(shuō)說(shuō)在普通顯微鏡下給細胞照相的竅門(mén)哈。人長(cháng)得好看，沒(méi)有照片也不行哈。
3.還有樓上miheshw說(shuō)的對，上清中的確實(shí)都是陣亡將士。沒(méi)有活下來(lái)的，一個(gè)沒(méi)有
21號，準備凍存2支細胞，照片是凍存前的留影，細胞的密度不錯，和ATCC的照片有一比。只是消化的時(shí)候感覺(jué)不理想，前兩次消化的時(shí)候3ml EDTA，3min，2次，就能完全消化，這次是5ml，10min+3min，有一盤(pán)細胞還沒(méi)有完全消化，難道是知道要被凍存，耍賴(lài)不出來(lái) ？
（本文轉載：丁香通）
